Флуоресцентная ортотопическая модель мыши: имплантация GFP-экспрессирующих раковых клеток мышам для оценки прогрессирования опухоли in vivo

- Раковые клетки, экспрессирующие зеленый флуоресцентный белок или GFP, позволяют контролировать рост опухоли и метастазирование с помощью неинвазивной оптической визуализации. Обычно мы имплантируем эти клетки в ортотопическую модель, которая позволяет воссоздать микроокружение опухоли и имитировать взаимодействие опухолевых клеток с окружающей средой.

Начните с того, что положите мышь под наркозом на теплую грелку. Теперь вставьте его нос в носовую маску, чтобы обеспечить его кислородом и изофлураном, анестетиком. С помощью ножниц сделайте небольшой надрез и разрежьте ткань. Аккуратно вытяните селезенку вместе с поджелудочной железой и найдите хвост поджелудочной железы.

Загрузите в шприц суспензию флуоресцентных раковых клеток и аккуратно введите ее в хвост поджелудочной железы. В месте введения появляется поверхностный пузырь, подтверждающий успешную имплантацию. Поместите органы обратно в полость тела и закройте разрез стерильным швом. Теперь верните мышь в клетку и следите за ней до выздоровления.

По истечении желаемой продолжительности поместите мышь в камеру визуализации и сделайте снимки. Луч света попадает на раковые клетки и возбуждает GFP, который, в свою очередь, производит зеленую флуоресценцию. В следующем протоколе мы выполним хирургическую имплантацию GFP-экспрессирующих клеток рака поджелудочной железы в ортотопической мышиной мышиной модели.

Чтобы имплантировать клетки, сначала нанесите мазь на глаза мыши, находящейся под наркозом, и положите животное на грелку, накрытую стерильной простыней. Затем аккуратно продезинфицируйте бок животного тремя йодными скрабами, а затем тремя полосканиями 70% этанолом. После подтверждения отсутствия реакции на защемление пальца ноги загрузите примерно 200 микролитров подготовленных клеток в предварительно охлажденный 1-миллилитровый шприц TB, оснащенный иглой 18 калибра.

Замените иглу 18 калибра на иглу 27 калибра и поместите элементы обратно на лед. Затем найдите общую область селезенки в верхнем левом квадранте брюшной полости. С помощью щипцов зажмите кожу над селезенкой и сделайте разрез примерно в 1 сантиметр для создания кармана. Затем зажмите гладкую мускулатуру в верхней части селезенки и разрежьте ткань, чтобы получить доступ к брюшной полости.

Далее аккуратно возьмитесь за каудальный конец селезенки и вытяните его из полости тела. С помощью влажного стерильного ватного тампона разложите поджелудочную железу, прикрепленную к концу селезенки, чтобы найти хвост поджелудочной железы. Доставить 50 микролитров клеток в хвост поджелудочной железы. Затем медленно поверните иглу из поджелудочной железы.

Успешная имплантация будет выглядеть как поверхностный пузырь без каких-либо протечек. Верните органы в брюшную полость и оберните все мышцами и кожей. Затем с помощью шва 6-0 закройте разрез. После этого введите животным кетопрофен и наблюдайте за ними до полного выздоровления. В подходящий момент времени эксперимента используйте коммерческую систему визуализации мелких животных для визуализации роста опухоли у живого животного под анестезией и выберите соответствующие фильтры возбуждения и излучения.

Затем получите исходное изображение, используя только белый свет. Удерживая животное в том же положении, переключитесь на фильтры GFP и получите второе изображение. Чтобы проанализировать рост опухоли, наложите белые и флуоресцентные изображения для оценки флуоресцентной площади и интенсивности опухолевых клеток.