Мониторинг микроокружения опухоли на основе ПТМ: метод отслеживания изменений жесткости ВКМ с использованием сфероидов опухолей

- При опухолевой инвазии периферические опухолевые клетки претерпевают эпителиально-мезенхимальный переход или ЭМП, что приводит к локальной деградации внеклеточного матрикса или ВКМ. Мы можем изучать взаимодействие опухолевых клеток с ВКМ in vitro.

Для изучения этих взаимодействий перенесите предварительно сформированный сфероид, полученный из опухолевых клеток поджелудочной железы, на пластину, содержащую коллагеновый каркас, вместе со встроенными флуоресцентными индикаторными зондами и культуральными средами. Сфероид опухоли высвобождает протеазы, которые разрушают коллаген и снижают жесткость ВКМ, что приводит к свободному перемещению индикаторных зондов в ВКМ.

Инкубируйте пластину в течение желаемого времени. Понаблюдайте за образцом под световым микроскопом, чтобы посмотреть на сетку точек образца в коллагеновом каркасе и записать с них видеоданные. Область матрицы вблизи сфероида показывает максимальную деградацию коллагена. Следовательно, он имеет увеличенное движение зонда. Напротив, область, удаленная от сфероида, демонстрирует меньшую деградацию коллагена, что приводит к ограничению движения молекул зонда.

Этот метод изучения реологических свойств ECM путем измерения тра