Оценка очагов повреждения ДНК: выявление очагов радиационно-индуцированного повреждения ДНК в линии раковых клеток с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания

- Ионизирующее излучение вызывает различные типы повреждений ДНК, такие как одноцепочечные разрывы или SSB и двухцепочечные разрывы или DSB. Одноцепочечные разрывы или SSB возникают, когда излучение повреждает основания и расщепляет остов ДНК, в то время как двухцепочечные разрывы, DSB, развиваются, когда два SSB возникают на противоположных цепях ДНК. Первым этапом формирования DSB является фосфорилирование гистона H2AX, которое можно визуализировать с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания.

Для проведения иммунофлуоресцентного окрашивания необходимо добавить первичные антитела к образцу, закрепленному на покровном листе, помещенном в чашку Петри. Антитела связываются с фосфорилированным гистоновым белком гамма-H2AX. Инкубируйте образец и промойте его PBS, чтобы удалить несвязанные антитела. Далее добавляют вторичные антитела, несущие флуорофоры, которые распознают первичные антитела и связываются с ними. Добавьте нужное количество флуоресцентного красителя DAPI для противодействия окрашиванию ядер.

Аккуратно закрепите защитное стекло на предметном стекле с монтажным материалом и наблюдайте за клетками под флуоресцентным микроскопом. Очаги гамма-H2AX проявляются в виде отчетлив