Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 3:50 мин. • April 30th, 2023
- Активные формы кислорода образуются преимущественно из митохондрий, когда электроны утекают из цепи переноса электронов. Эти электроны соединяются с молекулярным кислородом, образуя различные активные формы кислорода, или АФК. В раковых клетках происходит перепроизводство активных форм кислорода. Эти высокореактивные молекулы АФК могут окислительно повреждать мембраны, белки и ДНК внутри клетки.
Повышенный уровень АФК повреждает ДНК, что приводит к активации онкогенного сигнального пути, вызывающего прогрессирование рака. Поэтому жизненно важно определить уровни активных форм кислорода, вырабатываемых раковыми клетками.
Начните с забора раковых клеток из колоректального рака человека в соответствующую питательную среду. Затем засейте эти ячейки в многолуночный планшет и добавьте раствор DCFH-DA. Инкубируйте тарелку в течение желаемого времени. DCFH-DA проникает через клеточную мембрану. Попадая внутрь клетки, DCFH-DA превращается в DCFH в присутствии клеточного фермента эстеразы. Кроме того, в результате окисления DCFH активными формами кислорода образуются зеленые флуоресцентные молекулы.
Наблюдайте за клетками под флуоресцентным микроскопом. Интенсивность зеленой флуоресценции
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео