Создание мышиной модели колоректального рака PDOX: изучение прогрессирования колоректального рака на мышиной модели

- Лимфатические узлы, или ЛН, обеспечивают микросреду для роста опухоли благодаря стромальным клеткам, присутствующим в ЛН. Фолликулярные дендритные клетки, или ЛДК, являются наиболее распространенными типами стромальных клеток, которые выделяют хемокины, цитокины и факторы роста, которые взаимодействуют со стволовыми клетками колоректального рака и увеличивают рост опухоли.

FDC также способствуют экстранодальному метастазированию колоректального рака в такие органы, как легкие и печень. Чтобы изучить прогрессирование колоректального рака, мы имплантируем раковые клетки опухолевого происхождения пациента в орган, который соответствует гистотипу опухоли в мышиной модели с ослабленным иммунитетом, известной как ортотопический ксенотрансплантат, полученный от пациента, или PDOX.

Начните с закрепления мыши, находящейся под наркозом, в лежачем положении на доске для вскрытия с помощью лабораторного скотча. Теперь смешайте необходимое количество меченых люциферазой клеток колоректального рака и FDC в пробирке. Полученную суспензию возьмите в шприц. Далее найдите анальное отверстие мыши и введите приготовленную смесь колоректального рака в подслизистый слой прямой кишки.

Чтобы наблюдать метастатическую нагрузку, вводите люциферин внутрибрюшинно каждую неделю и визуализируйте мышь с помощью биолюминесцентной визуализации. В присутствии фермента люциферазы и АТФ люциферин в раковых клетках превращается в оксилюциферин, испуская сине-зеленый свет. В следующем протоколе мы создадим ортотопическую модель мыши с ксенотрансплантатом для изучения прогрессирования колоректального рака.

- Чтобы создать модель мыши с КРР, поместите находящегося под наркозом шести-восьминедельного самца NOD SCID в лежачее положение под препарирующим микроскопом, закрепив морду к носовому конусу изофлурана, а передние конечности с помощью ленты для устойчивости. Поместите небольшой предмет, например, небольшой отрезок марли, под основание хвоста, приподняв анальное отверстие для улучшения видимости и угла обзора. Используйте изогнутые, смазанные щипцами с тупыми наконечниками для расширения анального канала и обнажения дистальных отделов анальной и ректальной слизистой оболочки и удаления каловых масс.

Подсоедините стерильную съемную иглу 30 калибра к стеклянному шприцу объемом 50 микролитров. Наберите в шприц 10 микролитров суспензии опухолевых и HK-клеток, приготовленной на предыдущих этапах. Введите 10 микролитров в дистальный отдел задней подслизистой оболочки прямой кишки, расположенный на высоте от 1 до 2 миллиметров над анальным каналом, следя за тем, чтобы они не попали в полость малого таза. Наконец, извлеките мышь из изофлуранового конуса носа и наблюдайте за ней в течение одного часа после процедуры на предмет признаков дистресса.