Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 3:36 мин. • April 30th, 2023
- Претаргетная радиоиммунотерапия или PRIT использует иммуноконъюгат или конструкцию антитела, которая связывается с радиоактивным лигандом, демонстрируя при этом высокое сродство к опухолевому специфическому антигену клеточной поверхности. Для предварительного нацеливания возьмите нужную концентрацию этих антител в шприц, обработанный белками сывороточного альбумина. Лечение сывороткой предотвращает связывание этих антител со стенками шприца.
Затем поместите модель мыши с колоректальной опухолью под тепловую лампу, чтобы расширить ее хвостовую вену. Введите антитела в расширенную вену. По мере того, как эти иммуноконъюгаты достигают опухолевого участка, их высокое сродство к опухолеспецифичному антигену клеточной поверхности способствует их накоплению в ткани.
Впоследствии примите соответствующую дозу радиоактивного лиганда. Введите радиолиганд в расширенную хвостовую вену мыши с предварительным нацеливанием. Как только эти молекулы достигают опухолевого участка, они соединяются с антителами. Высокая доза радиации, испускаемая во время радиоактивного распада этих лигандов, убивает опухоль-мишень, сводя к минимуму воздействие на нормальные клетки.
В следующем протоколе мы покажем претаргетную радиоиммунотерапию с использованием трансциклооктен-модифицированных антител и меченных Лютецием-177 тетразеновых радиолигандов на мышиной модели колоректального рака.
- Отсортируйте самок атимических обнаженных мышей с ксенотрансплантатом колоректального рака так, чтобы средний объем опухоли в каждой когорте был примерно равным. Для этого перечислите идентификационные номера животных, рисунок ушной выемки и объем опухоли в трех отдельных столбцах программы для работы с электронными таблицами. Отсортируйте данные от наименьшего к наибольшему объему опухоли. В четвертом столбце присвойте каждому животному номер клетки.
Перемещайтесь по клеткам змеиным образом, пока все животные не будут распределены по клеткам. После того, как клетки назначены, отсортируйте данные по номеру клетки. Для введения иммуноконъюгата необходимо набрать дозы 150 микролитров раствора huA33-TCO в шприцы, предварительно обработанные 1% бычьим сывороточным альбумином в PBS, и хранить эти шприцы на льду. Для введения радиолиганда сначала вводят дозы в 150 микролитров 0,9% стерильного физиологического раствора, содержащего 1,1 молярного эквивалента меченого радиоактивного излучения Tz-PEG7-DOTA по отношению к введенному количеству huA33-TCO.
С помощью штангенциркуля измерьте самую длинную сторону продолговатой опухоли, а также ширину, которая перпендикулярна длине. Взвесьте каждую мышь на весах, чтобы отслеживать прибавку в весе или потерю его с течением времени. Наконец, рассчитаем объем по формуле для объема эллипсоида, предполагая, что высота примерно равна ширине.