Циркулирующая экстракция микроРНК: метод выделения микроРНК из образцов плазмы с помощью органической экстракции и обогащения малых РНК

- МикроРНК или микроРНК — это небольшие некодирующие РНК, которые регулируют экспрессию генов путем деградации мРНК или блокирования их трансляции в функциональные белки. Циркулирующие микроРНК являются потенциальными биомаркерами рака и могут быть экстрагированы из жидкостей организма, таких как плазма. Для начала смешайте плазму с денатурирующим раствором, который одновременно гомогенизирует образец и ингибирует рибонуклеазы, разрушающие РНК.

Обработайте кислотным фенол-хлороформом и центрифугой, чтобы разделить образец на две фазы: нижнюю органическую фазу, содержащую ДНК и белки, и верхнюю водную фазу, содержащую РНК. Восстановите водную фазу. Добавьте абсолютный этанол, чтобы осаждать РНК из раствора.

Доведите концентрацию этанола в образце до 25%, чтобы задать начальное условие, способствующее разделению больших РНК. Переложите смесь в заранее собранный фильтрующий картридж и центрифугу. Крупные РНК избирательно иммобилизуются на фильтре, в то время как более мелкие микроРНК собираются в фильтрате.

Впоследствии увеличьте концентрацию этанола до 55% для выделения микроРНК. Перенесите фильтрат в новый фильтрующий картридж и центрифугу, чтобы захватить микроРНК. Поместите картри