Мечение органоидных клеток CRC: метод получения органоидных клеток колоректального рака, трансдуцированных лентивирусом GFP

- Органоиды представляют собой трехмерные клеточные конструкции in vitro, которые самоорганизуются, чтобы имитировать ключевые характеристики тканей органа своего происхождения. Чтобы начать мечение, обработайте собранные органоиды коктейлем протеолитических и коллагенолитических ферментов, чтобы диссоциировать клетки на суспензию. Центрифуга для отделения клеток от надосадочной жидкости, содержащей фермент. Выбросьте надосадочную жидкость. Растворите клеточную гранулу с помощью среды, содержащей лентивирусные векторы. Эти рекомбинантные вирусы несут кодирующую последовательность для зеленого флуоресцентного белка или GFP.

Вирусы сливаются с клетками и высвобождают свой генетический материал и определенные вирусные ферменты в цитоплазму. Вирусная обратная транскриптаза синтезирует комплементарную вирусную ДНК, которая перемещается в ядро хозяина. Вирусная интегразаза помогает включить вирусную ДНК, содержащую последовательность GFP, в геном хозяина. Выращивайте эти трансдуцированные клетки во внеклеточном матриксе или культуральном планшете, покрытом ВКМ. Отсадите среду и центрифугируйте для сбора любых неприкрепленных клеток. Ресуспендируйте элементы в дополнительном ВКМ.

Наложите