Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 2:57 мин. • April 30th, 2023
- Начните с посева зеленого флуоресцентного белка, или GFP, экспрессирующего органоиды колоректального рака. Соберите органоиды. Обработайте раствором фермента для отслойки клеток, чтобы диссоциировать органоиды в одноклеточную суспензию. Центрифуга для отделения надосадочной жидкости, содержащей фермент. Удалите надосадочную жидкость. Ресуспендируйте GFP-экспрессирующие клетки колоректального рака с помощью искусственной внеклеточной среды, содержащей матрикс. Загрузите суспензию ячейки в шприц и удерживайте ее на льду, чтобы предотвратить затвердевание матрицы при температуре окружающей среды.
Далее подготовьте мышь, находящуюся под наркозом, в положении лежа на спине. Аккуратно вытяните слизистый слой прямой кишки через анальное отверстие. Теперь введите приготовленную GFP-экспрессирующую суспензию раковых клеток в подслизистый слой прямой кишки, содержащий сеть кровеносных сосудов. Дайте мыши восстановиться.
В течение нескольких дней в месте инъекции развивается первичная опухоль, экспрессирующая GFP. При спонтанном метастазировании эти опухолевые клетки отделяются и попадают в кровоток. В конце концов, клетки экстравазируются в отдаленные органы и размножаются, образуя GFP-положительные метастатические опухоли. В следующем протоколе мы покажем создание модели колоректального рака у мышей со спонтанным метастазированием путем ортотопической инъекции колоректальных органоидных клеток, экспрессирующих GFP.
- Чтобы создать мышиную модель спонтанного метастазирования опухолевых ксенотрансплантатов, полученных от пациентов с КРР, диссоциируйте GFP-меченые органоиды, как показано, и разбавьте суспензии одиночных опухолевых клеток в соотношении 5 умно-10 до пяти опухолевых клеток на 50 микролитров PBS, добавив 50% концентрацию искусственного внеклеточного матрикса. Загрузите 50 микролитров клеток каждой мыши в шприц, оснащенный иглой 22 калибра, и поместите опухолевые клетки на лед.
Затем подтвердите отсутствие реакции на защемление пальца ноги и поместите первую мышь под наркозом NOG в положение лежа на лабораторном столе. С помощью стерильного пинцета аккуратно вытяните слизистую оболочку прямой кишки из анального отверстия и сразу же введите опухолевые клетки в подслизистую оболочку прямой кишки.