Мышиные модели спонтанных метастазов: платформа для изучения метастатического потенциала ортотопически вводимых клеток колоректального рака

- Начните с посева зеленого флуоресцентного белка, или GFP, экспрессирующего органоиды колоректального рака. Соберите органоиды. Обработайте раствором фермента для отслойки клеток, чтобы диссоциировать органоиды в одноклеточную суспензию. Центрифуга для отделения надосадочной жидкости, содержащей фермент. Удалите надосадочную жидкость. Ресуспендируйте GFP-экспрессирующие клетки колоректального рака с помощью искусственной внеклеточной среды, содержащей матрикс. Загрузите суспензию ячейки в шприц и удерживайте ее на льду, чтобы предотвратить затвердевание матрицы при температуре окружающей среды.

Далее подготовьте мышь, находящуюся под наркозом, в положении лежа на спине. Аккуратно вытяните слизистый слой прямой кишки через анальное отверстие. Теперь введите приготовленную GFP-экспрессирующую суспензию раковых клеток в подслизистый слой прямой кишки, содержащий сеть кровеносных сосудов. Дайте мыши восстановиться.

В течение нескольких дней в месте инъекции развивается первичная опухоль, экспрессирующая GFP. При спонтанном метастазировании эти опухолевые клетки отделяются и попадают в кровоток. В конце концов, клетки экстравазируются в отдаленные органы и размножаются, образуя GFP-пол