Создание экспериментальной модели метастазов на мыши: имплантация GFP, экспрессирующих органоидные клетки CRC, в модель PDX для обнаружения микрометастазов

- Микрометастазы — это небольшая группа раковых клеток, которые выделяются из первичной опухоли и распространяются в различные части тела через кровь или лимфатические узлы. Чтобы обнаружить микрометастазы, суспензируйте органоидные клетки колоректального рака в PBS для поддержания pH и загрузите клеточную суспензию в шприц. Затем поместите мышь под наркозом в положение лежа на хирургической кровати. Сделайте небольшой надрез с помощью ножниц на нижней части левого бока и обнажите селезенку. Аккуратно вытяните селезенку с помощью пинцета и медленно введите клеточную суспензию в селезенку. Закройте разрез с помощью швов и верните животное в клетку. Следите за ним, пока он не восстановится.

По истечении нужного периода инъекции пожертвуйте мышью для рассечения первичных опухолей и разных тканей. Наблюдайте за рассеченными тканями под флуоресцентным микроскопом. У GFP-экспрессирующих раковых клеток развивается первичная опухоль в месте инъекции в селезенке. Несколько раковых клеток из первичной опухоли перемещаются в другой орган, обычно в печень, чтобы образовать микрометастатические колонии. В следующем протоколе мы создадим экспериментальную мышиную модель метастазов из GFP-экспрессирующих органоидных клеток колоректального рака.

- Для создания экспериментальной модели метастазирования опухолевых ксенотрансплантатов пациента с КРР разбавьте суспензии одиночных опухолевых клеток в соотношении 4 раза по 10 до 4 клеток в концентрации 50 микролитров и загрузите 50 микролитров клеток на мышь в шприц, оснащенный иглой 22 калибра. Поместите первую мышь NOG под наркозом в положение лежа на скамейке и сделайте небольшой разрез в нижней области левого бока.

С помощью стерильных ножниц и пинцета аккуратно разрежьте брюшину и обнажите селезенку, а пинцетом захватите жир, прикрепленный к селезенке. Затем медленно введите 50 микролитров суспензии опухолевых клеток в селезенку, следя за тем, чтобы не наблюдалось утечки.

После того, как все мыши были введены инъекции и зашиты по мере необходимости, верните животных в их домашние клетки и проверьте наличие швов и жизнеспособность через день после доставки опухолевых клеток. Используйте штангенциркуль для еженедельного измерения опухолей, собирая первичные опухоли и соответствующие ткани до соответствующих экспериментальных конечных точек. Перенесите рассеченные опухоли и органы в 5 миллилитров ледяного PBS в 10-сантиметровую чашку Петри на льду и наблюдайте за рассеченными тканями под стереофлуоресцентным микроскопом, чтобы оценить их экспрессию GFP.