Анализ связывания микротрубочек в клетках КРР: метод изучения связывающего микротрубочек тау-белка в клетках колоректального рака

- Тау — это белок, связанный с микротрубочками, участвующий в стабилизации и сборке микротрубочек. Многие раковые клетки экспрессируют гиперфосфорилированный тау-белок, который не может поддерживать хорошо организованное связывание микротрубочек. Чтобы изучить взаимодействие между тау-белком и микротрубочками, добавьте лизат раковых клеток, содержащий тау-белок, и рабочий раствор микротрубочек в микрофугальную пробирку.

Нефосфорилированные тау-белки, присутствующие в клеточном лизате, связываются с микротрубочками. Теперь добавьте желаемое количество буфера PEM в пробирку, чтобы стабилизировать активность тубулина, белка, который полимеризуется в филаменты с образованием микротрубочек. Инкубируйте смесь в течение нужной продолжительности.

Центрифугируйте смесь, чтобы измельчить белок, связанный с микротрубочками. Несвязанный белок остается в надосадочной жидкости. Переложите надосадочную жидкость в свежую пробирку и повторно суспендируйте гранулу в подходящем буфере. Добавьте гелевый буфер в ресуспендированную суспензию гранул и запустите образцы на полиакриламидном геле, чтобы отделить белок, связанный с микротрубочками, и электроблот на подходящей мембране.

Добавьте подходящие ан