Выделение ЦОК из образца цельной крови: метод получения ЦОК из модели колоректального рака у мышей

- Циркулирующие опухолевые клетки, или ЦОК, — это раковые клетки, которые происходят из первичной опухоли и попадают в кровоток. Большинство ЦОК могут выживать в кровотоке, не прикрепляясь к поверхности; Таким образом, мы можем обнаружить их непосредственно из крови большинства больных раком.

ЦОК в крови могут указывать на распространение опухоли внутри организма, поэтому их идентификация помогает понять прогрессирование рака. Начните с взятия мышиной модели под наркозом колоректального рака и получите кровь с помощью пункции сердца. Перелейте кровь в коническую пробирку, содержащую среду с градиентом плотности, и центрифугуйте для разделения компонентов крови.

Отбросьте самый верхний слой, содержащий плазму, и соберите фракцию мононуклеарных клеток периферической крови, или PBMC, присутствующую на границе раздела, в отдельную пробирку. Затем добавьте антитело против EpCAM к клеткам PBMC и наблюдайте под флуоресцентным микроскопом. Циркулирующие ЦОК экспрессируют клеточный маркер, известный как молекула адгезии эпителиальных клеток или EpCAM. Таким образом, антитела против EpCAM могут помочь идентифицировать EpCAM-положительные ЦОК.

Соберите ЦОК и сохраните их для дальнейшего анали