Лазерная микродиссекция: метод выделения инвазионных клеток колоректального рака из 3D-органотипической модели культуры

- 3D-органотипические модели колоректального рака представляют собой культуры in vitro, спроектированные для имитации микроокружения опухоли in vivo. Культура часто содержит стромальные клетки, такие как фибробласты, совместно культивируемые с эпителиальными клетками колоректального рака, в подходящем микроокружении внеклеточного матрикса.

В укоренившихся культурах опухолевые клетки с метастатическим потенциалом проникают во внеклеточный матрикс. Чтобы изолировать эти вторгающиеся клетки, сначала обработайте органотипическую модель формальдегидом для фиксации клеток и внеклеточного матрикса. Инкубируйте с алкоголем для обезвоживания образца.

Далее заделите в жидкий парафин для создания тканевого блока. Используйте ультрамикротом для получения тонко нарезанных срезов. Установите секции на соответствующее предметное стекло

.

Добавьте ксилол для депарафинизации срезов. Последовательно инкубируйте срезы в уменьшающихся концентрациях этанола для регидратации образцов.

Лечите Cresyl Violet для окрашивания и дифференцировки клеток колоректального рака из микроокружения. Положите предметное стекло на предметный столик для микроскопа лицевой стороной вниз. С помощью соответствующего программ