Анализ тракционной цитометрии: метод количественной оценки силы тракции, оказываемой раковыми клетками на ЭКМ

- Клетки генерируют механические силы, которые действуют на внеклеточный матрикс. Эта сила называется тяговой силой. Клетки оказывают тяговое усилие для выполнения различных задач, таких как миграция и пролиферация.

Метастатические раковые клетки оказывают большее тяговое усилие, чем здоровые клетки, поэтому мы проводим анализ тракционной цитометрии для измерения тяговых сил, оказываемых клетками на эластичные субстраты. Начните с посева желаемого количества клеток рака толстой кишки на полиакриламидный гидрогель, гель, который имитирует ECM in vitro. Гель содержит белки фибронектина, которые помогают клеткам прилипать к поверхности, и флуоресцентные шарики, которые действуют как маркер для изменения положения.

Инкубируйте клетки в течение нужного срока. Клетки прилипают к гелю и оказывают тяговое усилие, что вызывает смещение флуоресцентных шариков. Теперь поместите пластину под флуоресцентный микроскоп и сделайте снимок смещенных флуоресцентных шариков. Затем добавьте желаемое количество трипсина в пластину, чтобы отсоединить клетки, и проанализируйте силу тяги, которую оказывают клетки, с помощью соответствующего программного обеспечения. В следующем протоколе мы выполним анализ тракционной силовой микроскопии для анализа клеточной тракции клеток рака толстой кишки человека.

- Для проведения анализа тракционной силовой микроскопии сначала нагрейте 0,25% раствор трипсина-ЭДТА 10% SDS до 37 градусов Цельсия на водяной бане в течение 10 минут до начала эксперимента по вытяжению. Извлекайте по одному гелю из инкубатора для клеточных культур и поставьте на предметный столик микроскопа. Обнаружив в поле зрения одну ячейку, снимите крышку чашки Петри и сделайте фазово-контрастное изображение ячейки.

Далее переключите режим визуализации на флуоресцентный и выберите подходящий фильтр. Не перемещайте предметный столик или образец микроскопа в течение этого времени. Затем сделайте снимок флуоресцентных шариков, вытесненных клеточным вытяжением. Теперь добавьте 1 миллилитр раствора Trypsin SDS в чашку Петри, чтобы отделить клетку от геля. Сделайте эталонное изображение бусин после того, как ячейка будет удалена.