Моделирование ксенотрансплантата, полученного от пациента: метод создания мышиных моделей меланомы

- В моделях ксенотрансплантата или PDX, полученных от пациента, опухолевые клетки или фрагменты пациентов имплантируются мышам с иммунодефицитом. Модели PDX моделируют биологические и молекулярные характеристики микроокружения опухоли человека. Чтобы разработать модель PDX меланомы, сначала необходимо собрать опухолевую ткань у пациента с меланомой. Удалите некротизированную ткань из опухоли. Измельчите опухоль до получения кашицы. Затем подготовьте мышь-реципиента под наркозом в положении лежа. Сделайте небольшой хирургический разрез на тыльной стороне кожи. Аккуратно разрежьте фасциальную оболочку или слой рыхлой соединительной ткани прямо под кожей. Это отделяет кожу от нижележащих мышечных слоев и помогает создать карман для имплантации опухоли.

Аккуратно перенесите опухолевую кашицу в карман. Теперь введите искусственный внеклеточный матрикс в карман для стабилизации и обезопасивания имплантированных опухолевых клеток. Хирургическим путем скрепите рану и дайте мыши восстановиться. Еженедельно наблюдайте за мышью-реципиентом, чтобы наблюдать за ростом опухоли ксенотрансплантата. В следующем протоколе мы продемонстрируем подкожную имплантацию опухолевых клеток меланомы пациента мыши с иммунодефицитом NSG для создания моделей ксенотрансплантата, полученных от пациента с меланомой.

- Чтобы имплантировать ткань путем хирургического иссечения или хирургической биопсии, сначала сбривают волосы с нижней части спины шести-восьминедельных мышей под наркозом в возрасте от шести до восьми недель, оставляя без волос область размером примерно от 1,5 до 3 сантиметров. Подготовьте опухолевые куски и разделите опухолевую суспензию в чашке Петри на отдельные холмики для хирургической имплантации. С помощью лезвия скальпеля сделайте надрез длиной примерно 5 миллиметров по центру задней части мыши. С помощью одной пары щипцов приподнимите кожу на стороне разреза, противоположной оператору. С помощью ножниц в другой руке отделите кожу от мышечного слоя, аккуратно разрезав фасциальную мембрану небольшими ножницеобразными надрезами, тем самым создав карман для опухолевой ткани.

С помощью лезвия скальпеля возьмите один кусок опухоли, а также одну отдельную горку ткани опухолевой суспензии и аккуратно поместите ткань в созданный карман. Затем добавьте 100 микролитров искусственного внеклеточного матрикса на холмик опухолевой ткани в кармане. С помощью двух пар щипцов подтяните разрез с обоих концов так, чтобы края раны прилегали близко друг к другу. Затем наложите один или два зажима для раны, чтобы закрыть рану. Подкожно вводят 1-5 миллиграмм на килограмм анальгетика. Когда заживление завершится, примерно через 7 дней, снимите зажимы для раны.