Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 3:02 мин. • April 30th, 2023
- В экспериментальных моделях рака на мышах индуцированный рак у животного напоминает человеческий рак по фенотипу. Они обеспечивают эффективную платформу для оценки эффективности потенциальных методов лечения. Чтобы вызвать двухступенчатую модель канцерогенеза кожи, сначала подготовьте мышь с ослабленным иммунитетом под наркозом в положении лежа. Сбрейте его шерсть, чтобы обнажить нижележащую кожу. На первом этапе нанесите сильнодействующее средство, инициирующее опухоль, на открытую тыльную поверхность кожи.
Эти волосяные фолликулы в фазе покоя или телогена содержат неактивные сальные железы. Возникающее в результате этого отсутствие оттока кожного сала позволяет накапливать соединение в этих волосяных фолликулах. Соединение диффундирует в окружающие клетки и индуцирует мутацию гена-мишени, в первую очередь в стволовых клетках волосяного фолликула или первичных кератиноцитарных стволовых клетках. Измененная экспрессия генов вызывает инициацию опухоли в этих клетках.
На втором этапе нанесите подходящее средство, стимулирующее рост опухоли, на спинную поверхность кожи несколько раз в течение желаемых временных интервалов. Химическое вещество стимулирует увеличение инициируемой клеточной популяции. Продолжающаяся пролиферация клеток приводит к образованию канцерогенных выростов, называемых папилломами.
В следующем протоколе мы показываем создание двухступенчатой модели канцерогенеза кожи у мышей с использованием химических веществ DMBA, мутагена, и TPA, агента, стимулирующего рост.
- Перед началом эксперимента поместите агрессивных мышей в возрасте от 7 до 9 недель в отдельные клетки, чтобы избежать драк и повреждений кожи. Для индукции папилломы кожи сначала сбривают заднюю часть кожи подопытных животных, а мышей взвешивают по отдельности. Через сорок восемь часов после бритья с помощью пипетки нанесите 50 микрограммов ДМБА в 200 микролитрах ацетона на выбритый участок каждой мыши, находящейся под наркозом.
Для стимуляции папилломы кожи, через семь дней после применения ДМБА, обрабатывайте кожу 5 микрограммами ТФА в 200 микролитрах ацетона, два раза в неделю до конца эксперимента. Каждую неделю осматривайте животных на наличие папиллом, фотографируйте и записывайте размер каждой отдельной папилломы на карте.
Пальпируемое образование диаметром более 1 миллиметра считается папилломой, если оно остается более одной недели.