Рекомбинантный препарат вириона на основе полиомавируса клеток Меркеля (MCPyV): способ получения рекомбинантного вириона MCPyV с высоким титром

- Полиомавирус клеток Меркеля, или MCPyV, представляет собой онковирус с двухцепочечной ДНК с кольцевым геномом, который вызывает карциному клеток Меркеля, тип рака кожи. Чтобы получить вирионы MCPyV, сначала обрабатывают адгезивную культуру упаковочных клеток коктейлем, содержащим агент для трансфекции, вирусный геном и две экспрессирующие плазмиды, кодирующие белки, необходимые для стимулирования репликации вируса.

Во время инкубации трансфекционный реагент образует липоплексы с плазмидами, облегчая их доставку в клетки-упаковки. Оказавшись внутри ядра, клеточный механизм обеспечивает экспрессию вирусных и плазмидных геномов. Экспрессирующие плазмиды кодируют белки антигена большой опухоли и антигена мелкой опухоли. Эти белки транслоцируются в ядро и стимулируют репликацию вирусной ДНК. Впоследствии вирусный геном кодирует структурные белки капсида. Эти белки перемещаются в ядро и помогают в сборке рекомбинантных вирионов.

Далее соберите культивируемые клетки. Обработайте их раствором, содержащим моющее средство и ДНКазу. Детергент лизирует клетки, чтобы высвободить вирусы. ДНКаза разрушает любую свободную плазмидную ДНК из суспензии. Центрифуга для отделения клеточного мусора в