Генетическая модификация первичных кератиноцитов человека: метод генетической манипулирования кератиноцитами с помощью рекомбинантных ретровирусов

- Кератиноциты — это выделяющийся тип клеток, присутствующий в эпидермисе или самом внешнем слое кожи. Чтобы генетически модифицировать кератиноциты, начните с культуры ретровирусной упаковки клеток феникса. Затем добавляют смесь, содержащую ретровирусные векторы, несущие интересующий ген, и реагент для трансфекции. Инкубируйте пластину в течение желаемого времени.

Реагент для трансфекции облегчает доставку вирусного генетического материала в клетки-контейнеры. Эти специально разработанные клетки кодируют белки, необходимые для производства ретровирусного капсида, и способствуют упаковке ретровирусной векторной РНК, несущей интересующий ген. После упаковки зрелые вирусы выходят из клеток в среду. Теперь перенесите взвешенную вирусом среду в чашку для свежей культуры, содержащую первичные кератиноциты. Дополните культуру нужным раствором катионного полимера.

Катионный полимер нейтрализует отрицательные заряды на мембранах вируса и кератиноцитов, повышая эффективность слияния вируса с поверхностью клетки. При слиянии вирус высвобождает свою РНК в цитоплазму клетки, которая обратно транскрибируется в двухцепочечную ДНК. Эта вирусная ДНК проникает в ядро и интегрируется с геномом керат