Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 6:44 мин. • April 30th, 2023
- Анализ на образование колоний определяет способность отдельных клеток к пролиферации и образованию колоний. Начните с иссечения спинной кожи мыши в культуральной тарелке. Соскребите подкожную клетчатку и жир с вентральной стороны кожи. Обработайте ткани раствором для пищеварения. Протеолитические ферменты в растворе разрушают внеклеточный матрикс, вызывая диссоциацию эпидермальных клеток.
Аккуратно соскребите эпидермальный слой, чтобы высвободить диссоциирующие клетки и волоски в среду для сбора. Отфильтруйте суспензию через соответствующее ситечко, чтобы улавливать волоски или любой мусор и получить одноклеточную суспензию эпидермальных клеток. Перенесите желаемый объем этой клеточной суспензии в покрытую коллагеном пластину, содержащую адгезивный слой питающих клеток, остановленных ростом. Дополните подходящей средой, способствующей выживанию кератиноцитов.
Во время культивирования кератиноциты прикрепляются к питающему слою. Кроме того, эти фидерные клетки секретируют факторы роста и синтезируют белки внеклеточного матрикса, которые поддерживают рост кератиноцитов. В зависимости от пролиферативной способности отдельных кератиноцитов, они начинают образовывать колонии. Удалите
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео