miniCoopR Векторный трансгенез: метод скрининга генов, индуцирующих меланому, в модели опухоли данио-рерио

- У рыбок данио меланома возникает в результате злокачественной трансформации меланоцитов – клеток, продуцирующих меланин. Для изучения начала меланомы используйте модель склонных к меланоме трансгенных рыбок данио-рерио с дефицитом меланоцитов. В этой модели отсутствуют меланоциты из-за потери функции мутации в ее меланоцит-специфичном промоторе mitfa.

Начните с того, что возьмите одноклеточный эмбрион этой трансгенной модели на агаровой пластине. Одновременно введите в эмбрион смесь, содержащую вектор miniCoopR на основе транспозона и мРНК фермента транспозазы. Вектор содержит генную кассету, содержащую миниген mitfa, несущий промотор, связанный с геном-кандидатом, зажатым между двумя элементами транспозона.

Коинъецируемые мРНК кодируют белки транспозазы. Эти белки воздействуют на элементы транспозона и катализируют кассетное эксцизию из вектора miniCoopR с последующей его интеграцией в геномную ДНК эмбриона. Впоследствии промотор кассеты управляет экспрессией как гена mitfa, так и гена-кандидата, представляющего интерес.

Ген mitfa поддерживает спасение и развитие меланоцитов, в то время как ген-кандидат, если он онкогенный, вызывает начало меланомы. Просмотрите развитую рыбку да