Окрашивание меланоцитов чешуи антителами: метод обнаружения транскрипционных факторов, экспрессируемых в дорсальных чешуйчатых меланоцитах моделей рыбок данио

- Факторы транскрипции — это белки, содержащие ДНК-связывающие домены. Они связываются с определенными последовательностями ДНК и помогают регулировать экспрессию генов в клетках. Чтобы определить экспрессию транскрипционного фактора в меланоцитах, связанных с чешуей, сначала собирают темные пигментированные дорсальные чешуйки у рыбок данио, находящихся под наркозом. Зафиксируйте чешуйки и обработайте их раствором для пермеабилизации, чтобы сделать отдельные меланоциты проницаемыми.

Обработайте раствором отбеливателя, чтобы удалить из клеток темные гранулы пигмента меланина. Этот процесс отбеливания исключает вероятность появления пигментных фоновых сигналов на последующих этапах окрашивания. Инкубируйте с блокирующим раствором, содержащим белки, чтобы блокировать неспецифические участки связывания белков на поверхности клетки.

Теперь обработайте образец желаемыми первичными антителами. Эти антитела связываются со своими мишенями транскрипционными факторами внутри клеток. Затем пометьте образец вторичными антителами, помеченными флуоресцентными метками, специфичными к первичным антителам. Кроме того, обработайте образец подходящим флуоресцентным ДНК-связывающим красителем, чтобы ок