Анализ инвазии опухолевых клеток: 3D-метод in vitro на основе нативного матрикса для оценки взаимодействий эпителиально-мезенхимальных клеток

- Чтобы начать анализ, сначала пипетку пипетку суспензию клеток фибробластов с добавлением аскорбиновой кислоты в луночный планшет и инкубируют. Аскорбиновая кислота увеличивает пролиферацию фибробластов. Он также стимулирует секрецию нативных компонентов ВКМ, тем самым встраивая пролиферирующие клетки в толстый внеклеточный матрикс.

Аккуратно освободите матрицу от поверхности пластины и дайте ей всплыть в среде. Матрикс сжимается и становится толще при большем отложении и ремоделировании матрикса, что приводит к образованию ткани, напоминающей нативную дерму. Разложите матрицу по пористой сетке. Затем засейте эпителиальные раковые клетки над матриксом и инкубируйте, чтобы клетки прижились и прикрепились.

Перенесите сборку на сетчатую платформу, предварительно собранную в посуде. Добавьте среду в дополнение только к нижнему слою матрицы, чтобы создать воздушно-жидкостную границу раздела для вышеуказанных ячеек. Во время культивирования интерфейс способствует пролиферации и дифференцировке опухолевых клеток. Клетки также секретируют протеазы, которые разрушают ВКМ, способствуя их миграции и вторжению в матрикс.

В следующем протоколе мы продемонстрируем анализ инвазии с использование