Pseudofracture: острая периферическая модель травмы тканей

При переломе длинной кости, такой как бедренная или большеберцовая кость, поврежденная мышца и мягкие ткани подвергаются воздействию поврежденных костных фрагментов и костного мозга. За этим следует сильный иммунный ответ для помощи в восстановлении тканей. Модель для изучения эффектов этого воздействия может быть создана путем забора бедренных костей и большеберцовых костей.

От мыши-донора. Кости измельчаются для создания костного раствора, который затем вводится в поврежденное бедро мыши-реципиента. Затем контролируют иммунные реакции и оценивают повреждения отдаленных органов для изучения долгосрочных последствий травмы, вызванной переломами.

Основное преимущество этой методики по сравнению с существующими методами лечения травмы периферических тканей, такими как двусторонняя модель перелома бедренной кости, заключается в том, что эта модель, модель псевдоперелома, обеспечивает долгосрочную выживаемость без осложнений длительной анестезии или сложных техник фиксации перелома и, следовательно, позволяет изучать иммунные реакции на поздних сроках после травмы. Перед началом процедуры подготовьте следующие принадлежности: ведро со льдом, хирургические инструменты Betadine, гемостатики GREs, ступку и щипцы для пестика, иглы 20 калибра, шприц A one CC, анестезию PBS и изоф фторсодержащий конус для носа. Единственное усыпленное совпадение по возрасту и весу.

Геническая донорская мышь должна обеспечивать достаточно материала для трех реципиентов. Прикрепите донор к доске из оргстекла, убедившись, что нижние конечности обмотаны скотчем только на кончике стопы. Тщательно выбрейте нижние конечности.

Затем полностью покрыть их Бетадином и спиртом для стерильности, удалить длинные кости из нижней конечности, сделать хирургический разрез в кожу в паховой области, а в дальнейшем разрезать кожу по длине конечности вплоть до лодыжки, втянуть кожу и рассечь ее подальше от подкожной клетчатки и мышцы, как в медиальной, так и в латеральной проекции. Затем вставьте одно лезвие ножниц под мышцы, которые лежат спереди и сбоку от большеберцовой кости. Сдвиньте лезвие проксимально и дистально, чтобы аккуратно приподнять мышцы от основной кости.

Повторите эту технику на задней и медиальной нижней стороне большеберцовой кости, чтобы разделить мышцы под большеберцовой костью. При дистанционном скольжении следует использовать минимальное дополнительное усилие на задней стороне, чтобы оторвать малоберцовую кость от большеберцовой кости на проксимальном конце этих мышц ноги. Разрежьте сухожилия как можно ближе к их вставкам и втяните мышцы дистально, одновременно стягивая мышечную группу вместе.

Не отделяйте большеберцовую кость от бедренной кости в этом месте, это соединение дает дополнительный рычаг, который поможет в рассечении бедренной кости от тазобедренного сустава. Используйте аналогичную технику для расслабления мышц из бедренной кости. Выполняйте это сзади, а также медиально и латерально, если это необходимо.

Разрежьте дистальное прикрепление этих групп мышц, чтобы освободить их от коленного сустава. Расширяйте разрез кожи по мере необходимости, чтобы добиться адекватного воздействия, и проведите под мышцами. Чтобы рассечь конец бедренной кости из тазобедренного сустава, удалите бедренную кость и прикрепите большеберцовые кости от донорской мыши и поместите их на стерильную марлю.

Разделите две кости в коленном суставе, просто взяв каждую кость в отдельную руку и осторожно скручивая или вращая две кости в противоположных направлениях вдоль их длинных AE. Чтобы удалить оставшиеся сухожильные прикрепления с длинных костей, оберните кусок марли четыре на четыре по длине кости. Крепко возьмитесь и соскребите кости по всей длине несколько раз, чтобы удалить оставшиеся ткани с поверхности.

Поместите собранные кости в стерильную микропробирку объемом 1,5 миллилитра на льду. Транспортируйте донорские кости в тщательно продезинфицированный бокс биологической безопасности. Для приготовления костного раствора.

Капюшон должен быть подготовлен с помощью стерильной полевой повязки, стерильной ступки и пестика, стерильной пары щипцов, стерильной восьмилитровой трубки PBSA стерильной пипетки объемом один миллилитр с соответствующими наконечниками пипетки. Человек-пипетка объемом 100 микролитров с соответствующими наконечниками, одним миллилитровым шприцем и иглами 20-го калибра с помощью щипцов переносит кости в ступку и с помощью пестика аккуратно раздавливает кости. Внесите пипеткой один миллилитр PBS в ступку и продолжайте измельчать оставшиеся фрагменты круговыми движениями, чтобы обеспечить полную реактивную суспензию.

Затем добавьте еще один миллилитр PBS и продолжайте измельчать до создания костного раствора, который должен иметь розовый оттенок. Медленно вылейте раствор из раствора в восьмилитровую трубку, следя за тем, чтобы после нее остались более крупные остатки. Переложите костный раствор в одномиллилитровый шприц.

При использовании иглы 20 калибра костный раствор должен остаться на льду. Нанесите пипеткой один микролитр костного раствора на пластину Мак Конгара, равномерно распределив по поверхности. Инкубируйте планшет от 24 до 48 часов, чтобы обеспечить стерильность.

Начните хирургическую процедуру при травме мягких тканей и инъекции костного раствора с оценки глубины анестезии у мыши, находящейся под наркозом пентабарбитала. Щипать. Поместите мышь в лежачем положении на доску из плексигласа и обездвижите животное, неплотно обмотав тонкими полосками скотча липкой стороной вокруг дистальной части каждого конечности с помощью ножниц Oscar a five с лезвием размера 40. Оббрейте брюшную, паховую и бедренную области животного.

Перенесите мышь в стерильное операционное поле. Протрите операционную область бетадином. Затем протрите спиртом, чтобы простерилизовать его.

Поместите на мышь носовой конус, содержащий кусочек марли с одним миллилитром 99% изофтора. Как только дыхание животного начнет замедляться, удалите носовой конус. Если требуется дополнительная анестезия на протяжении любой части процедуры, может быть введен дополнительный пентобарбитал или введен изофтор.

Далее сложите стерильную полевую повязку и накиньте ее на мышь, чтобы можно было обнажить только нижние конечности и голову. Эта травма мягких тканей представляет собой двустороннюю травму задней конечности. Убедитесь, что мышь расположена так, что задние конечности слегка отведены и повернуты в сторону.

Это помогает в доступе к нужной мышце. Сгруппируйте сгибатели колена для выполнения раздавливания травмы: Зажмите большой 18-сантиметровый гемостат вокруг задней части бедра, мускулатуру средней точки вдоль бедренной кости с ее выпуклым изгибом, обращенным к бедренной кости. Заблокируйте гемостат только на 30 секунд при первом щелчке.

Введите иглу через кожу на два-три миллиметра, так как кончик скоса как раз соприкасается с бедренной костью. Введите по 0,15 миллилитра костного раствора в раздавленную мускулатуру бедра с каждой стороны. Извлеките иглу и быстро поместите стерильный палец в перчатке на место инъекции, чтобы остановить обратный поток костного раствора из раны.

Задержите этот палец там на несколько секунд. Поместите мышь обратно в клетку и обеспечьте полную свободу движений непосредственно после того, как анестезия спадет. Подходящий. Обезболивание необходимо проводить, когда мышь просыпается.

На этой общей схеме показан двухфазный иммунный ответ после травмы в момент нулевого часа. Индуцируется травма. За этим следует ранняя гипервоспалительная реакция, которая достигает пика через шесть часов и измеряется путем оценки системного воспаления и дисфункции отдаленных органов.

Вторым компонентом посттравматического иммунного ответа является отсроченная иммуносупрессия, измеряемая дисфункцией иммунных клеток, которая изображается в виде минимума около 48 часов. Это репрезентативная диаграмма воспалительного цитокинового ответа в плазме, который возникает вскоре после травмы и является примером системного воспаления. Установлено, что дисфункция отдаленных органов, измеряемая по повреждению печени, повышена в течение аналогичного периода времени.

Эта репрезентативная диаграмма является примером для выделения дисфункции иммунных клеток на поздних этапах после травмы. Пытаясь выполнить эту процедуру, важно помнить о необходимости обеспечения стерильности и точности манипуляций на протяжении всего эксперимента. Это не является моделью истинного перелома или раневой инфекции.