Протокол Mosquito воспитание (А. gambiae)

Меня зовут Шиш, я постдок в лаборатории доктора Джорджа Оу в Школе общественного здравоохранения Университета Джонса Хопкинса. В отделе молекулярной микробиологии и иммунологии я продемонстрирую способ разведения комаров вида Anopheles gambiae. В лаборатории мы содержим их в инсектарии, где обычно поддерживается температура 27 градусов Цельсия и влажность 80%.

В помещении для содержания насекомых также поддерживается 12-часовой цикл смены дня и ночи, чтобы имитировать естественные природные условия. Таким образом, перед нами помещение для содержания насекомых, представляющее собой базовый центр нашего учреждения, где содержатся данные особи. Как видите, здесь есть лотки с комарами на всех различных стадиях развития: яйца, разные стадии личинок и куколки.

В этих кюветах находятся личинки в возрасте примерно 11 или 12 дней, а в этой клетке мы собираем взрослых комаров и содержим их на 10% растворе сахарозы. Чтобы начать разведение комаров, нам необходимо обеспечить их кормлением кровью, так как белок, содержащийся в крови, необходим им для откладки яиц. Таким образом, первый день отсчитывается с момента сбора взрослых особей в клетку и их содержания на 10% растворе сахарозы.

В первый день комаров кормят кровью, для чего используется искусственная мембрана для кормления. Это стеклянный питатель, который мы применяем для мембранного кормления комаров. Мы вводим кровь внутрь через небольшое отверстие, которое вы видите, и она удерживается в нем.

Снизу по бокам расположены два сопла, которые подключены к водяной бане, поддерживаемой при температуре 37 °C. Чтобы поддерживать кровь теплой при 37 °C, приготовим питатель для кормления: возьмем небольшой кусочек парафильма. Растянем его за два конца со всех четырех сторон, а затем закрепим на открытом конце стеклянного питателя, чтобы создать тонкую мембранную пленку, имитирующую кожу.

Это так называемая мембранная подача. Здесь используется циркуляционная водяная баня, которая поддерживает температуру воды на уровне 37 °C и прогоняет её через стеклянный питатель, чтобы кровь оставалась теплой при 37 °C. Мы соединяем стеклянный питатель с помощью небольших капилляров с циркуляционной водяной баней и включаем её для циркуляции воды; при этом вода и кровь не смешиваются, так как находятся в двух разных камерах.

Это клетка с взрослыми комарами Phis Gambi. Перед нами стеклянный кормушка, которая подключена к циркуляционному термостату; мы закрепляем зажим в верхней части клетки и добавляем 200 microliter крови. В клетке находятся как самцы, так и самки комаров.

Только самки питаются кровью. Процесс питания продолжается около 30 минут. Через два дня после кормления кровью мы помещаем в клетку с комарами стаканчики для яиц, чтобы они могли отложить в них яйца.

Процедура выполняется следующим образом. Мы берем небольшой стакан, частично заполняем его дистиллированной водой, берем фильтровальную бумагу, смачиваем ее, затем сворачиваем в конусообразную форму и помещаем этот конус в стакан с дистиллированной водой, убеждаясь, что бумага полностью увлажнена. Затем мы медленно открываем клетку с комарами, стараясь не допустить их вылета наружу, и помещаем внутрь стаканчики с яйцами.

На следующий день после помещения стаканов в клетку, то есть на четвертый день, их медленно извлекают из клетки. Перед вами яйца, черного цвета, среди которых также присутствуют погибшие комары. Когда яйца будут готовы, поместите их на пластиковый поднос.

Затем пластиковый лоток наполняют дистиллированной водой. Возьмите фильтровальную бумагу с икринками и перенесите их в лоток. Также добавьте щепотку корма А (измельченного рыбьего корма) и поместите лоток в стеллаж.

Нам следует выровнять лоток в день его запуска, а также определить, какие здесь виды. Это делается на следующий день после помещения яиц в лоток. То есть этим экземплярам один день, но согласно протоколу, это пятый день развития комаров.

Черные объекты — это яйца, из которых вот-вот вылупятся личинки. А это корм для комаров. Для разведения комаров мы обычно используем три различных вида корма.

Корм A представляет собой измельченный корм для рыб; мы добавляем его при запуске культуры комаров, когда они находятся на стадии X, при этом ежедневно добавляем две таблетки корма C, который является кормом для кошек фирмы Purina. Через восемь или девять дней мы меняем воду в лотке на свежую. В это время вместо корма A мы добавляем щепотку корма B, который представляет собой измельченный корм C (также измельченный корм для кошек), а также две таблетки корма C, при этом яйца вылупляются в личинок.

Существует три разные стадии развития личинок: первая, вторая и третья стадии. В кюветах находятся личинки в возрасте пяти или шести дней.

Это особи Ravi, которые находятся на гораздо более поздней стадии развития, примерно девяти-десяти дней от роду. За это время вода неоднократно менялась, добавлялась свежая вода и свежий корм. В этом лотке находятся как взрослые особи, так и ppe.

Как вы видите, это взрослые особи, летающие под противомоскитными сетками. А по краям видны темные куколки, из которых вылупятся взрослые особи. Когда взрослые особи появятся, их можно будет собрать в клетку, которая выглядит следующим образом.

Внутри находится подложка из бумажного полотенца, а также небольшой флакон с 10% супер-раствором и контейнер с мыльным хлопком, которые будут служить источником питания для комаров. Мы закрыли крышку; перед нами аппарат — аспиратор, который подключен к вакуумному насосу и с помощью которого будут собраны взрослые особи из этих лотков. Эта часть аспиратора подключена здесь, а другой её конец находится с другой стороны.

Подключите устройство к вакуумному насосу. Поместите клетку, в которой мы будем собирать взрослых особей, в этот небольшой бокс. Это еще одна часть аспиратора с длинной трубкой, которую следует поместить внутрь лотка с комарами.

Другой конец будет подключен к камере. Необходимо убедиться, что все соединения герметичны и вакуум работает исправно. Закрываем крышку и проверяем герметичность всей системы.

Медленно запустите систему сбора. После того как установка будет готова, осторожно поместите эту длинную трубку в лоток с комарами, убедившись, что сетка закрыта и насекомые не могут вылететь наружу. Как видно, комары собираются в маленькой клетке.

Медленно перемещайте трубку по всей площади, чтобы собрать всех взрослых особей. Сейчас я почти закончил. Все взрослые особи собраны, и все они находятся в этой клетке, которую вы видите.

Затем мы медленно сбрасываем вакуум и демонтируем устройство для сбора. Перед нами взрослые комары вида Ana Gambi, которые будут находиться в этой клетке несколько дней. Они будут питаться 10% sucrose, а для стимуляции откладки яиц им будет предоставлена кровь.

Я только что продемонстрировал вам, как содержать комаров. При разведении комаров Finis mb в лабораторных условиях наиболее важными этапами являются кормление кровью, затем размещение стаканчиков для яиц, отслеживание яиц, после чего они проходят через различные стадии развития, такие как личинки, куколки и имаго.

И, наконец, мы собираем взрослых особей. Важность данной методики заключается в необходимости имитации условий естественной среды обитания для получения здоровых комаров, которых затем заражают плазмодием для проведения различных исследований малярии, основной целью которых является искоренение этого заболевания во всем мире.