Методика исследования Footshock-индуцированные Восстановление Кокаин ищу в лабораторных крыс

В этом видео показана процедура систематического изучения взаимосвязи между стрессом и рецидивом в связи с поиском кокаина. На лабораторных крысах крыс сначала обучают самостоятельному введению кокаина внутривенно, выполняя реакцию на рычажное нажатие в течение нескольких ежедневных сеансов в темную или активную фазу 12-часового цикла светлой темноты. Затем реакция рычажного пресса, подкрепленная кокаином, гасится в течение нескольких сеансов путем отказа от условного подкрепления.

Погасшее нажатие на рычаг затем восстанавливается путем воздействия на животных периодического удара ногой непосредственно перед тем, как им предоставляется доступ к ранее усиленному кокаином рычагу. Несмотря на то, что вызванное шоком ногой возобновление поиска кокаина является эффектом, который был надежно достигнут несколькими исследовательскими группами, он может быть чувствителен к определенным параметаллическим переменным. Протокол, который мы опишем, отражает наши успешные усилия по оптимизации этих параметров для достижения надежного и надежного восстановления поиска кокаина у крыс, вызванного шоком ноги.

Методы, которые мы описываем здесь сегодня, и их вариации могут быть использованы для изучения ключевых вопросов в области наркомании, в частности, они могут быть использованы для изучения фундаментальных поведенческих и нейробиологических механизмов, опосредующих связь между стрессом и рецидивом в поисках наркотиков. Оборудование, используемое для изучения восстановления поиска кокаина, вызванного ударом ноги, включает в себя набор стандартных оперантных камер, каждая из которых находится в звукопоглощающем корпусе. Все оборудование поставлено компанией Med Associates Incorporated (Мед Ассошиэйтс Инкорпорейтед).

Каждая оперантная камера оснащена двумя выдвижными рычагами, оба приподняты на 6,5 сантиметров над полом из нержавеющей стали. Белый раздражитель расположен чуть выше одного рычага. Так называемый активный рычаг и реакции на этом рычаге приводят к одновременному включению стимульного света и активации инфузионного насоса, расположенного на полке сразу за верхней торцевой камерой.

В шумопоглощающем кожухе другой рычаг, так называемый неактивный рычаг, остается выдвинутым в камере. На протяжении всех экспериментальных процедур реакция на этот рычаг не имеет последствий. Наконец, каждая камера оборудована для подачи постоянного тока, прерывистого и иссякаемого электрического удара ногой через скрамблер на пол из стального стержня.

Все экспериментальные условия, а также запись и консолидация данных осуществляются с помощью интерфейсов между испытательными камерами и центральным компьютером. Операционная середина программного обеспечения. Перед каждым ежедневным сеансом, который происходит в темную или активную фазу светло-темнового цикла, взвешивают крыс в помещении и затем переводят их в оперантные камеры.

За 24 часа до первого сеанса самостоятельного введения кокаина позволяют крысам привыкнуть к оперантным камерам в течение одного двухчасового сеанса. Во время этого сеанса активный рычаг убирается, а неактивный рычаг выдвигается в начале ежедневных тренировок, подключают пружину и трубку в сборе к канюле, установленной на черепе, и помещают крысу в оперантную камеру. Канюля подключена к катетеру celesta, который был хирургически имплантирован в правую яремную вену для внутривенной доставки лекарств.

Позвольте крысам самостоятельно принимать кокаин во время ежедневных трехчасовых сеансов в течение восьми-десяти дней. Каждой тренировочной сессии предшествует пятиминутный период акклиматизации, в течение которого животные помещаются в оперантные камеры с убранным активным рычагом. Чтобы начать тренировку, выдвиньте активный рычаг в камеру и зажгите свет стимула на 30 секунд.

Кроме того, включите свет в доме в это время и пусть он остается освещенным на протяжении всего сеанса. В совокупности эти события сигнализируют о наличии кокаина во время сеанса. Реакции на активном рычаге подкрепляются трехсекундной инфузией кокаина в фиксированном соотношении, при этом одна схема подкрепления, совпадающая с активацией инфузии, насоса и доставки лекарства, представляет собой 22-ю активацию стимульного света над активным рычагом.

Это 22-е световое представление соответствует периоду ожидания, в течение которого регистрируются дополнительные активные реакции рычага, но не усиливаются. Во время каждого трехчасового сеанса животным разрешается проводить максимум 50 инфузий, чтобы снизить вероятность передозировки. В конце каждого ежедневного сеанса промывайте катетеры крыс от 0,2 до 0,3 миллилитров раствора гепарина декстро, а затем возвращайте их в домашнюю клетку.

После последнего сеанса самостоятельного приема кокаина оставьте крыс в покое в их домашней клетке как минимум на пять-семь дней. Переводите крыс в оперантные камеры для тренировки по угасанию в соответствии с условиями обучения. Перед каждым днем тренировки по вымиранию предшествует пятиминутный период акклиматизации, в течение которого животные помещаются в оперантные камеры с убранным активным рычагом.

Затем дайте крысам четыре сеанса 60-минутного угасания, разделенных 30-минутными интервалами. Каждая 60-минутная сессия начинается с тех же событий, которые происходят в начале тренировочных сессий на протяжении всех сессий. Поддерживайте все условия, которые присутствовали во время тренировки, за исключением того, что больше не усиливайте активные реакции рычага с помощью инфузий кокаина в течение 30-минутных интервалов, которые разделяют каждую 60-минутную сессию угасания.

Втяните активный рычаг и погасите свет в доме в конце последнего 60-минутного сеанса. Верните крыс в их домашнюю клетку. Эти шаги повторяются в течение трех дней подряд.

Переводите крыс в оперантные камеры, как это делается во время фазы вымирания, в соответствии с условиями обучения и вымирания. Обеспечьте пятиминутный период акклиматизации, в течение которого крысы помещаются в оперантные камеры с убранным активным рычагом. Затем дайте крысам два сеанса по 60 минут, разделенных 30-минутным интервалом, идентичным тем, которые проводились во время фазы вымирания.

Если после второго 60-минутного сеанса общее количество реакций на ранее активный рычаг составляет менее 15, дайте животным тест на восстановление после дополнительного 30-минутного интервала, в течение которого применяется удар ногой или фиктивный удар ногой. Начиная через 10 минут после второго 60-минутного сеанса угасания, подвергните животных 20-минутному периодическому электрическому удару ногой, стрессу или фиктивному удару ногой в оперантной камере. Применяйте удар ногой в то время, когда активный рычаг втягивается, а свет дома и стимулов гаснет.

Сразу же после окончания сеанса удара ногой выдвигается активный рычаг и позволяет крысе нажать на рычаг в условиях затухания. Этот период времени определяется как сеанс восстановительного теста и обычно длится от одного до трех часов. В конце сеанса испытания извлеките крысу из камеры и верните ее в домашнюю клетку.

Теперь мы покажем некоторые репрезентативные результаты. Здесь показана типичная кривая тренировки самостоятельного введения кокаина, которая включает в себя общее количество инфузий и общее количество активных и неактивных прессов на печень. Крысы обычно приобретают самостоятельное введение кокаина в течение одного-трех сеансов, и как только поведение установится, они будут поддерживать стабильный уровень потребления наркотиков в течение последующих сеансов в первый день исчезновения.

Когда реакции не подкреплены в первый раз, общее количество реакций на активном рычаге первоначально очень велико, но постепенно уменьшается в течение четырех сессий затухания на второй и третий дни затухания. Может наблюдаться некоторое восстановление реакции, однако, как правило, реакции меньше, чем в начале предыдущего дня угасания, и угасание обычно протекает быстрее в течение четырех сеансов в течение этого дня. Неусиленная реакция на активном рычаге.

После 20 минут воздействия прерывистого удара ногой стресс вызывает увеличение реакции на ранее активный рычаг по сравнению с неактивным. Шок стопы также вызывает увеличение реакции по сравнению с наблюдаемой. В условиях, при которых вводится фиктивный мел для ног После освоения описанные процедуры могут быть завершены примерно за шесть недель.

По нашему опыту, успех оптимизируется, когда процедура проводится систематически и хорошо обученными руками. Процедуры, которые мы здесь описали, могут быть легко адаптированы для различных фармакологических или нейрохимических манипуляций, нацеленных на определенные нейронные субстраты. С добавлением таких манипуляций, процедура индукторной и констатации стопы может служить мощным инструментом для характеристики нейробиологии угасания и рецидива приема лекарств к поиску лекарств под воздействием стресса.