Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 1:37 мин. • August 7th, 2025
Начните с первичной культуры среднего мозга из эмбрионов крыс, содержащей дофаминергические нейроны, которые сверхэкспрессируют мутировавший альфа-синуклеин.
Заменяйте среды в очистных лунках свежими средами, содержащими исследуемое соединение, а в контрольных лунках - простыми средами. Затем инкубировать.
В контроле альфа-синуклеин образует токсичные агрегаты в дофаминергических нейронах, вызывая ретракцию нейритов и приводя к гибели нейронов.
В процессе лечения тест-соединение взаимодействует с альфа-синуклеином, препятствует его агрегации, сохраняет структуру нейритов, обеспечивает нейропротекцию.
Фиксируйте и проникайте в клетки, затем блокируйте неспецифические сайты связывания.
Инкубируйте с первичными антителами для маркировки всех нейронов, с дополнительной маркировкой для дофаминергических нейронов.
Промойте клетки и добавьте помеченные флуорофорами вторичные антитела, специфичные к первичным антителам.
Используя инвертированный флуоресцентный микроскоп, подсчитайте дифференциально меченые дофаминергические нейроны, а затем переключитесь на конфокальный микроскоп для измерения длины нейрита.
Более высокое количество дофаминергических нейронов с интактными нейритами в процессе лечения по сравнению с контрольной группой подтверждает нейропротекторный потенциал испытуемого соединения.