Адресная доставка вируса к кортикоспинальным нейронам у неонатальной крысы для изучения повреждения спинного мозга

Начните с неонатальной крысы, находящейся под наркозом, с хирургическим путем обнаженным шейным отделом спинного мозга.

Этой крысе был введен антероградный вирус, кодирующий дизайнерский рецептор и флуоресцентный белок, вирус нацелен на нейроны кортикоспинального тракта (КСТ) в соматомоторной коре головного мозга.

Определите среднюю линию спинного мозга с помощью спинномозговой артерии.

Поместите стеклянную иглу, содержащую ретроградный вирус, который кодирует фермент рекомбиназу, позади целевой спинномозговой пластинки, где находятся окончания аксонов CST.

Опустите иглу в спинной мозг и введите вирус.

Дайте вирусу диффундировать, затем медленно извлеките иглу и зашите разрез.

Вирус проникает в окончание аксона КСТ и ретроградно перемещается к телу клетки, где экспрессирует фермент рекомбиназу.

Этот фермент активирует трансген, доставляемый антероградным вирусом, обеспечивая экспрессию дизайнерского рецептора и флуоресцентного белка только в дважды инфицированных нейронах. Этот метод позволяет проводить целенаправленный анализ нейронов КСТ при травме спинного мозга.

Для прямых инъекций в спинной мозг используйте кончик стеклянной инъекционной иглы, чтобы приблизиться к средней линии спинно