Трансплантация нейронных предшественников, полученных из стволовых клеток, в срезы коры головного мозга человека

Начните с адгезивной культуры нейрональных клеток-предшественников, полученных из стволовых клеток, подготовленных к дифференцировке в корковые нейроны.

Удалите среду, затем добавьте фермент, чтобы нарушить внеклеточный матрикс и отделить клетки.

Используйте ингибитор для нейтрализации фермента, затем добавьте свежую среду.

Переложите суспензию в пробирку, центрифугу и выбросьте надосадочную жидкость, чтобы изолировать клетки.

Ресуспендируйте клетки в матрице базальной мембраны, чтобы облегчить трансплантацию в ткани мозга, а затем загрузите их в холодную капиллярную трубку.

Возьмите срез коры головного мозга человека на трансвелловую сборку, содержащую среду.

Удалите часть среды, затем введите капельки клеточной суспензии в ткани.

Инкубируйте, чтобы матрица затвердела.

Добавьте среду для погружения ткани, а затем инкубируйте, чтобы позволить клеткам-предшественникам дифференцироваться в нейроны, удлинять свои невриты и формировать синапсы с корковыми нейронами хозяина.

Теперь корковый срез готов к анализу.

Извлеките среду из колбы для клеточных культур. На седьмой день дифференцировки отделите корковые клетки GFP-lt-NES, добавив 500 микролитров трипсина, и инкубируйте в течение 5-10 минут п