Стереотаксическое введение вирусов для стабильной генетической модификации в мышиной модели

Начните с мыши, находящейся под наркозом, с обнаженным черепом в стереотаксической рамке.

Опустите держатель шприца до тех пор, пока кончик иглы не совпадет с брегмой, точкой отсчета черепа.

Используя заранее определенные стереотаксические координаты, найдите желудочково-субвентрикулярную зону или

V-SVZ, нейрогенную нишу, в основном содержащую нейральные стволовые клетки или НСК, и отметьте эту область.

Извлеките шприц и осторожно просверлите небольшое отверстие, не допуская повреждения мозга.

Наполните стерильный шприц вирусами, несущими трансген, и расположите иглу над поверхностью мозга.

Переместите шприц и опустите его до тех пор, пока кончик не коснется самого внутреннего слоя поверхности мозга.

Проникните в мозг, чтобы добраться до V-SVZ, медленно введите вирус, задержите недолго, а затем извлеките шприц

.

В V-SVZ вирус проникает в НСК через мембранное слияние. Его РНК обратно транскрибируется в ДНК.

Затем эта ДНК интегрируется в геном НСК, обеспечивая стабильную генетическую модификацию НСК.

После обезболивания у шести-восьминедельных мышей бреют область между ушами. Далее продезинфицируйте кожу с помощью йодофора, такого как йод, повидон или 70% этанол. Затем поместите животное в поло