Перенос генов в шванновские клетки седалищного нерва грызунов с помощью электропорации

Начните с неонатальной крысы под наркозом, помещенной на грелку с обнаженным седалищным нервом.

Приподнимите дистальный участок нерва и введите раствор плазмидной ДНК, смешанный с красителем. Краситель помогает отслеживать доставку плазмид.

Поместите электрод пинцетального типа вокруг нерва, сохраняя небольшой зазор между плечами электрода.

Введите в этот зазор физиологический раствор для проведения тока.

Подайте электрический импульс вокруг нервных волокон, который создает переходные мембранные поры в шванновских клетках. Затем поменяйте местами положение электродов и подайте второй электрический импульс. Это усиливает проникновение плазмидной ДНК через поры.

После электропорации клеточная мембрана повторно герметизируется и захватывает плазмиду.

Очистите участок, заклейте разрез кожи, продезинфицируйте его и дайте крысе восстановиться.

Позже плазмидная ДНК перемещается в ядро и интегрируется в ДНК шванновской клетки, обеспечивая успешный перенос генов.

Осторожно потяните дистальную сторону нерва с помощью иглы, чтобы приподнять оголенный нерв. Вставьте стеклянную микропипетку в дистальный участок нерва и введите раствор ДНК, слегка надавливая на него, пока нерв не станет зеленым. Затем поместите платиновый электрод типа пинцера примерно в одном-двух миллиметрах от нерва.

Заполните зазор между электродом и нервом 0,9% раствором хлорида натрия. Подавайте электрические импульсы на место инъекции с помощью электропоратора. После первого набора импульсов инвертируйте электрод и подайте еще один набор импульсов.

После этого очистите место электропорации 0,9% раствором хлорида натрия. После электропорации закройте разрез цианоакрилатным клеем. Затем очистите рану повидон-йодом.

Снимите маску с животного и подержите ее на электрическом грелке не менее часа, чтобы обеспечить полное восстановление после анестезии