Офтальмологическая доставка лекарств для неинвазивной нейромодуляции в мышиной модели

Начнем с генетически модифицированной мыши, чьи нейроны гиппокампа экспрессируют дизайнерские рецепторы, активируемые исключительно дизайнерскими препаратами или DREADD.

Эти сконструированные рецепторы избирательно реагируют на синтетические исследуемые препараты, оставаясь нечувствительными к эндогенным молекулам.

Регулярно потирайте мышь, чтобы свести к минимуму стресс и акклиматизировать ее к процедуре.

Далее взвесьте мышь, чтобы рассчитать правильную дозировку препарата.

Во время работы с мышью используйте тусклый красный свет, чтобы предотвратить нарушение циркадных ритмов.

Аккуратно потрепайте мышь, чтобы обездвижить ее.

С помощью пипетки возьмите исследуемый раствор препарата и сформируйте на кончике каплю. Теперь подойдите к глазу

и выпустите каплю на его поверхность.

Верните мышь в домашнюю клетку. Повторите подачу препарата несколько раз.

Препарат всасывается через глаз и попадает в мозг.

Затем он пересекает гематоэнцефалический барьер и достигает области гиппокампа. Позже он связывается с рецепторами DREADD и активирует нейроны, обеспечивая точную, неинвазивную нейромодуляцию.

Для повторного введения CNO, начиная через четыре недели после инъекции, приучите животных к обращению, потирая каждую мышь по три минуты в день в течение трех-четырех дней до введения глазных капель. Когда мыши привыкнут к обращению, взвесьте каждую мышь, чтобы определить необходимое количество CNO, которое должно быть доставлено для достижения концентрации CNO в один миллиграмм на килограмм массы тела.

За два часа до выключения света во время неактивной фазы загрузите от одного до трех микролитров приготовленного раствора CNO в микропипетку P10 и обездвижьте мышь с помощью загривка. Медленно выдавливайте раствор до тех пор, пока на наконечнике пипетки не образуется устойчивая капля, и осторожно подносите каплю близко к роговице до тех пор, пока раствор не будет подведен, не касаясь кончика пипетки глазом мыши. Затем верните мышь в ее домашнюю клетку, прежде чем наносить каплю CNO на глаз следующего животного.

В случаях, когда CNO необходимо доставить во время активной фазы мыши, обеспечьте наличие тусклого красного света для правильного обращения с животными и доставки CNO.