Биолюминесцентная визуализация прогрессирования опухоли молочной железы на мышиной модели самки

Начните с того, что самке мыши ввели клетки опухоли молочной железы, экспрессирующие люциферазу.

Опухолевые клетки разрастаются в месте инъекции и развиваются в первичную опухоль.

Поместите мышь в камеру визуализации с потоком анестетика, чтобы обезболить мышь.

Затем введите люциферин, субстрат для люциферазы, находящейся под наркозом, мыши, находящейся под наркозом.

Люциферин циркулирует и проникает в опухолевые клетки, вступая в реакцию с люциферазой с выделением биолюминесценции.

С помощью системы визуализации захватите сигнал биолюминесценции от мыши.

Со временем опухоль прогрессирует в первичном очаге и метастазирует в легкие.

Получайте изображение мыши через равные промежутки времени и определяйте области интереса.

Основываясь на интенсивности биолюминесценции, построить кинетику роста опухоли для обоих участков.

Со временем устойчивое усиление сигнала в месте первичной опухоли указывает на непрерывную пролиферацию опухоли.

Тем не менее, резкое повышение биолюминесценции легких в более поздние моменты времени позволяет предположить метастазирование опухолевых клеток.

Для начала поддерживайте клеточную линию 4T1 в дополненной модифицированной среде Dulbecco's Modified Eagle Medium или DMEM. Инкубируйте клетки при температуре 37 градусов Цельсия во влажной атмосфере, содержащей 5 процентов углекислого газа.

Трансфектируйте клеточную линию 4T1 с помощью гена Luc2 для экспрессии люциферазы, биолюминесцентного фермента, который вырабатывается конститутивно. Инкубируйте клетки, чтобы они были готовы к инъекции мыши.

Через пять минут после обезболивания и подготовки самки мыши Balb-C введите 2 раза по 10 в силу пять люцифераз-экспрессирующих 4T1 клеток подкожно в левую спинку с помощью инсулинового шприца объемом 1 миллилитров. Содержать животное в течение 4 недель после инъекции.

Для визуализации поместите мышь под наркозом в лежачее положение в специально отведенной области биолюминесцентного оборудования для визуализации. Введите мышке внутрибрюшинно 100 микролитров раствора D-люциферина в концентрации 15 миллиграмм на миллилитр.

Чтобы настроить параметры изображения, установите эмиссионный фильтр открытым без возбуждения, биннинг на 8, F-стоп на 2 и тип поля зрения на D. Захватите 20 биолюминесцентных изображений в течение 20 минут для каждого животного в каждой точке изображения, гарантируя, что изображения представляют собой 60-секундную интеграцию сигнала.

Используя программное обеспечение оборудования, определите конкретные области интереса, чтобы различать сигналы первичной опухоли и метастазирования в легкие. Определите биолюминесцентные сигналы в месте инъекции и в грудном отделе, где происходит метастазирование. Рассчитайте прогрессирование опухоли на основе интенсивности биолюминесцентного сигнала.

Используя изображения, собираемые еженедельно, постройте профиль кинетики роста, чтобы представить изменения интенсивности сигнала с течением времени как в первичном очаге опухоли, так и в метастатических участках. Сравнивайте тенденции интенсивности сигнала для анализа прогрессирования опухоли и метастазирования.