Обнаружение бактерий in situ в срезах дессенной ткани мышей

Возьмите десневой срез мыши, заражённый патогенными бактериями, предварительно обработанный для доступа к бактериальной ДНК.

Примените буфер с зондом ДНК, маркированным дигоксигенином, направленным на бактериальную ДНК.

Поставьте защитное покрытие и герметизацию, чтобы предотвратить обезвоживание образца.

Введите тепло для денатурации ДНК, затем инкубируем в жарких и влажных условиях для гибридизации зонда.

Охладите затвор, снимите защитный слой и несколько раз промывайте буфером, чтобы удалить незавязанные зонды.

Добавьте блокирующий раствор, чтобы предотвратить связывание неспецифических антител.

Инкубировать с антителами, конъюгированными с ферментами, которые связываются с дигоксигенином.

Промывайте, чтобы удалить незавязанные антитела.

Добавьте ингибитор для селективной инактивации эндогенного фермента.

Нанесите субстрат, который реагирует с ферментом, чтобы получить цветной осадок.

Прополосните водой, чтобы удалить лишний субстрат.

Добавьте краситель для окрашивания ядер.

Стирайте, чтобы удалить лишний краситель.

Обезвоживайте в этаноле и обрабатывайте ксилолом для увеличения прозрачности тканей.

Поднимайся на секцию.

Под микроскопом визуализируйте бактерии внутри среза.

Начните на месте, сн