Живое изображение взаимодействий хозяина и патогена в эмбрионах данио-рерио, инфицированных Mycobacterium abscessus

Начните с анестезированных, прозрачных, трансгенных эмбрионов данио-рерио, экспрессирующих флуоресцентно маркированные макрофаги.

Эмбрионы предварительно вводятся в мышцу хвоста флуоресцентно маркированным грубым штаммом Mycobacterium abscessus для вызова локализованной инфекции.

Отсутствие поверхностных гликопептидолипидов у этих бактерий способствует их агрегации.

Обездвижите эмбрионы в агарозе с низкой температурой плавления и ориентируйте их так, чтобы открыть место заражения.

Когда агароза затвердеет, добавьте рыбью воду с анестетиком для поддержания анестезии и предотвращения обезвоживания.

Отслеживайте инфекцию в реальном времени с помощью флуоресцентной микроскопии.

После заражения эндогенные макрофаги мигрируют к бактериям и фагоцитозируют отдельные клетки.

Однако некоторые бактерии образуют пуповы — удлинённые внеклеточные агрегаты, которые размножаются, распространяются и сопротивляются фагоцитозу, вызывая гибель клеток хозяина и иммунную инфильтрацию.

Несмотря на это, иммунные клетки не удаляют пуповины, позволяя бактериям и мертвым клеткам хозяина накапливаться и образовывать абсцесс.

Это показывает, что шнур — это ключ M. Стратегия обхода иммунного обхода абсцесса .

Для живой визуализации инфекции M. abscessus установите анестезированные эмбрионы с трикаином в агарозе с низкой температурой плавления 1% в 35-миллиметровую чашку Петри с стеклянным дном для инвертированного микроскопа или в слайде с одной полостью для вертикальной конфокальной микроскопии. Направить эмбрион в нужное положение и покрыть затвердевшую агарозу водой с трикаином. Наконец, используйте флуоресцентный микроскоп с объективом 10X или флуоресцентный конфокальный микроскоп с объективами 40X или 63X для последовательного обнаружения флуоресценции и трансмиссиальной визуализации эмбриона.