Микро-рассечение мозга крысы для РНК или белка Извлечение из конкретного региона мозга
30 августа 2007 г.
Микро-рассечение мозга крыс в различных регионах является чрезвычайно важным для изучения различных нейродегенеративных заболеваний. Это видео демонстрирует микро-рассечение из четырех основных областей мозга включают обонятельной луковице, лобной коре, стриатуме и гиппокампе в свежей ткани мозга крысы. Полезные советы для быстрого удаления соответствующих регионов, чтобы избежать РНК и белка деградация ткани даны.
Здравствуйте, я Куинт с кафедры анатомии Гонконгского университета. Сегодня я продемонстрирую, как провести микродиссекцию мозга крысы с выделением четырех основных областей: префронтальной коры, полосатого тела, гипоталамуса и гиппокампа. Перед вами схематическое изображение, иллюстрирующее процесс диссекции мозга.
Выполняют три разреза. Первая плоскость разреза проходит в месте соединения обонятельной луковицы и фронтальной коры. Вторая плоскость разреза проходит по линии мозолистого тела.
Третья плоскость разреза проходит через передний кончик отдела phonics. После трех разрезов получится четыре пути мозга. С левой стороны расположен фактор.
С правой стороны расположен гиппокамп. Фронтальная кора находится между первым и вторым разрезами. Кодирующая нуклеаза, являющаяся частью слоя, располагается между вторым и третьим разрезами на свежем полушарии мозга.
Очень важно сначала определить мозолистое тело и фоникс. После этого можно будет легко найти места трех разрезов. Плоскость первого разреза проходит в месте соединения луковицы обонятельного нерва и фронтальной коры.
Вторая плоскость среза проходит по уровню мозолистого тела, а третья — по переднему краю обонятельных луковиц. Мы проведем препарирование мозга под микроскопом. Инструменты для препарирования хранятся на льду.
После промывки ледяной DEPC-воды мы помещаем мозг на металлическую охлаждающую пластину, разделяя его пополам на две полусферы. Отделяем или выделяем область выше фронтальной коры, собираем ее и храним в жидком азоте. Далее приступаем к сбору фронтальной коры. Выполняем разрез вокруг переднего конца мозолистого тела, вырезаем кору лобной доли, собираем ее и храним в жидком азоте.
Затем мы препарируем стриатум. Сделайте разрез в плоскости передней комиссуры и переднего пучка, выделите ядро, соберите его и поместите в жидкий азот. В завершение мы приступим к препарированию гиппокампа.
Сначала необходимо удалить средний мозг, чтобы обеспечить хороший доступ к гиппокампу. Отделите гиппокамп, собранный и хранившийся в жидком азоте. Различные области мозга связаны с различными нейродегенеративными заболеваниями. Например, стриатум связан с болезнью Паркинсона, в то время как фронтальная кора и гиппокамп связаны с болезнью Альцгеймера.
Точная микродиссекция мозга позволяет выявлять изменения уровней мРНК и белков в данной области.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данном видео продемонстрирована микродиссекция тканей мозга крысы с разделением на четыре основных региона: обонятельную луковицу, фронтальную кору, стриатум и гиппокамп. В видео представлены полезные рекомендации по быстрому извлечению этих областей для предотвращения деградации РНК и белков.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Нейронаука
- Нейроанатомия
- Нейродегенеративные заболевания
Теоретические сведения
- Микродиссекция имеет решающее значение для изучения областей головного мозга.
- Понимание различных нейродегенеративных заболеваний требует получения точных образцов тканей.
- Сохранение целостности РНК и белков необходимо для обеспечения точности исследований.
- В данном исследовании для диссекции используется свежая ткань головного мозга крысы.
Цель исследования
- Продемонстрировать эффективные методы диссекции областей мозга.
- Предоставить рекомендации по сохранению качества тканей в процессе диссекции.
- Способствовать проведению исследований нейродегенеративных заболеваний за счет правильного сбора образцов.
Используемые методы
- Микродиссекция мозга крысы с разделением на определенные области.
- Использование схематических изображений для руководства процессом диссекции.
- Применение специфических плоскостей среза для точного извлечения областей.
- Рекомендации по минимизации деградации РНК и белков во время диссекции.
Основные результаты
- Успешное выделение обонятельной луковицы, фронтальной коры, стриатума и гиппокампа.
- Продемонстрированные методы, обеспечивающие сохранение целостности тканей.
- Использование наглядных пособий для лучшего понимания процесса диссекции.
- Акцент на важности быстрого извлечения тканей для предотвращения их деградации.
Выводы
- Микродиссекция является ценным методом исследований в области нейробиологии.
- Применение правильных методов может значительно повысить качество образцов тканей.
- Данные методики могут помочь в изучении нейродегенеративных заболеваний.
Часто задаваемые вопросы
Промышленная значимость
Точная микродиссекция областей головного мозга крысы позволяет с высокой степенью достоверности экстрагировать РНК и белки для последующего молекулярного анализа в исследованиях нейродегенерации. Данная возможность имеет решающее значение для валидации мишеней и снижения механистических рисков на ранних этапах разработки препаратов, ориентированных на специфические для конкретных областей механизмы заболевания. Надежный региональный отбор проб обеспечивает трансляционную преемственность и обоснованность принятия решений по портфелю препаратов для лечения заболеваний ЦНС.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранний поиск и валидация мишени
- Позволяет изолировать значимые при заболевании области мозга для молекулярного профилирования.
- Обеспечивает функциональную валидацию мишеней путем установления связи между региональными изменениями и нейродегенеративной патологией.
- Способствует снижению механистических рисков, позволяя точно проверить гипотезы в определенных анатомических контекстах.
Скрининг и разработка анализа
- Обеспечивает получение высококачественных образцов тканей для разработки воспроизводимых молекулярных анализов.
- Гарантирует целостность РНК и белков, что необходимо для получения количественных данных в последующих этапах анализа.
- Стандартизирует подготовку образцов, повышая сопоставимость результатов анализов и надежность скрининга.
Трансляционные и доклинические исследования
- Приводит доклинические модели в соответствие с заболеваниями человека путем воздействия на гомологичные области мозга.
- Обеспечивает поиск и валидацию биомаркеров в анатомически релевантных тканях.
- Поддерживает обоснованное с учетом рисков продвижение исследований, предоставляя надежные молекулярные данные из определенных областей.
Интеграция конвейеров и рабочих процессов
Данный протокол микродиссекции объединяет этапы раннего поиска и доклинических исследований, позволяя проводить региональный молекулярный анализ для обоснования выбора мишеней и приоритизации перспективных соединений.
- Фундаментальная биология: облегчает проверку гипотез о механизмах нейродегенерации в отдельных областях мозга.
- Скрининг: обеспечивает получение стандартизированных высококачественных образцов для разработки методов анализа и оценки соединений.
- Аналитика: позволяет проводить количественное измерение изменений РНК и белков в различных областях мозга.
- Трансляционные исследования: связывает доклинические результаты с клинической значимостью за счет фокусирования на областях, вовлеченных в патологический процесс.
- Корпоративное использование: создает воспроизводимый рабочий процесс подготовки тканей, применимый в различных программах исследований ЦНС.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: Повышает достоверность прогнозов при выявлении молекулярных особенностей конкретных областей.
- Операционная ценность: Повышает воспроизводимость и стандартизацию обработки тканей.
- Стратегическая ценность: Улучшает процесс принятия решений о продолжении или прекращении исследований за счет снижения биологической неоднозначности в конвейерах анализа ЦНС.
- Влияние на портфель: Позволяет проводить приоритизацию мишеней нейродегенеративных заболеваний с учетом рисков.
Особенности реализации
- Требуются знания в области анатомии для точной идентификации областей и проведения диссекции.
- Необходим контроль соблюдения холодовой цепи и быстрая обработка образцов для сохранения целостности РНК и белков.
- Требуются стандартизированные протоколы для обеспечения воспроизводимости результатов между различными группами исследователей.
- Может потребоваться адаптация метода для различных моделей грызунов или отделов мозга.
- Зависимость от наличия специализированных инструментов для диссекции и инфраструктуры для криоконсервации.
