Слепой кишки Процедура прокола Лигирование

Здравствуйте, меня зовут Мигель Тоскано, я работаю в лаборатории доктора Дены на кафедре микробиологии и гематологии Университета Темпл. Сегодня мы покажем вам, как создать модель сепсиса с использованием iCal и пункции у мышей линии C 57 Black Seas. В нашей лаборатории мы используем эту модель для имитации сепсиса у людей.

В основе данной модели лежит перфорация серозной оболочки, которая приводит к попаданию фекального содержимого в брюшную полость, вызывая полимикробный сепсис и, как следствие, выраженный иммунный ответ. В данной модели многие органы и различные типы клеток подвергаются необратимому повреждению, что в конечном итоге может привести к гибели животного.

Приступим к работе. Анестезия мыши. Первым шагом является введение животному анестетика путем внутрибрюшинной инъекции.

Смесь кетамина и ксилазина в соотношении один к одному. Чтобы избежать укуса мыши и не причинить ей вреда, необходимо взять мышь за хвост одной рукой. Другой рукой прижмите ее спиной к полу.

Затем можно взять мышь за затылок и положить животное на спину, чтобы открыть доступ к брюшной полости. С помощью инсулинового шприца 29G в peritoneal cavity вводят от 20 до 30 µL анестетика. Для подготовки мыши к процедуре зафиксируйте её за загривок и выбрейте шерсть на животе, прижимая хвост и/или лапку мыши.

Мы проверяем, не чувствительна ли мышь к боли, затем дезинфицируем брюшную полость. Сначала область обрабатывают раствором Бетадина, после чего протирают салфеткой с изопропиловым спиртом в течение как минимум одной минуты. Выполнение лапаротомии. Чтобы выполнить лапаротомию, мы приподнимаем кожу в центре живота пинцетом и делаем небольшой надрез длиной около одного сантиметра.

Затем приподнимите промежность и сделайте еще один небольшой разрез, чтобы открыть брюшную полость. С помощью изогнутого пинцета захватите брюшину. Найдите и извлеките слепую кишку, аккуратно выведя ее через брюшину.

Поместите его на живот. Сейчас наступает момент перевязки. Это важный фактор.

Для определения степени тяжести модели можно модулировать характер процедуры. В зависимости от протяженности лигирования у мышей будет развиваться сепсис различной степени тяжести. Если лигирование проводится ближе к концу слепой кишки, развивается легкий сепсис; при лигировании посередине — сепсис средней степени тяжести, а при лигировании ближе к илеоцекальному клапану — тяжелый сепсис. Степень тяжести процедуры будет отражаться в проценте летальности.

Никогда не перевязывайте илеоцекальный клапан. Теперь выполните лигирование с помощью шелковой нити, завязав двойной узел для обеспечения плотности. Для выполнения пункции удерживайте слепую кишку и осторожно сделайте прокол рядом с местом лигирования, а затем сделайте еще один прокол ближе к концу слепой кишки. Стенка слепой кишки мягкая, поэтому она перфорируется очень легко.

Используя иглы различной толщины и выполняя одно или два прокола, мы также можем регулировать степень тяжести модели. Описанный здесь метод одного или двух проколов является альтернативной техникой классическому сквозному последовательному проколу. Преимущество метода одного или двух проколов заключается в том, что можно лучше контролировать количество выходящих фекальных масс при сжатии слепой кишки.

Удерживая слепую кишку двумя пальцами, осторожно выжмите её, чтобы извлечь очень небольшое количество фекалий. После закрытия лапаротомии приподнимите брюшину и аккуратно верните слепую кишку в брюшную полость.

Будьте предельно осторожны, чтобы избежать случайного прокалывания слепой кишки. Рекомендуется использовать пинцеты большего размера. Теперь необходимо закрыть брюшную полость. Используя шелковую нить, крайне важно убедиться, что полость надежно закрыта.

Мы начинаем с одного края раны, где завязываем узел. Продолжаем накладывать швы до противоположного края, проходя шелком под петлей предыдущего прокола. Для закрытия кожи можно использовать зажимы для ран Митчелла или рефлекторные зажимы, используя соответствующий инструмент для их фиксации.

Установите столько зажимов, сколько необходимо, чтобы рана была полностью закрыта. Проведите реанимацию мышей, подкожно введя 1 мл предварительно подогретого физиологического раствора. Эта мера по восполнению жидкости, выполняемая с помощью иглы 25G, индуцирует гипердинамическую фазу сепсиса, завершая процедуру.

Поместите мышь под инфракрасную лампу для обогрева или, в качестве альтернативы, на греющую подкладку до полного пробуждения животного от наркоза. Поместите корм и воду на дно клетки и каждые 8–12 часов осматривайте животных на наличие признаков заболевания. Для послеоперационного обезболивания введите бупренорфин подкожно.

В качестве альтернативного анальгетика можно использовать T.Tramadol. Признаками и симптомами сепсиса являются лихорадка, вялость, пилоэрекция, диарея, сжатие в комок и общее недомогание. У тяжелобольных животных наблюдается резкое снижение температуры тела, и они почти не двигаются, чтобы избежать страданий.

На данном этапе животных следует подвергнуть эвтаназии. Таким образом мы проводим лигирование селезенки и создание пункционной модели. Надеемся, что эта демонстрация процедуры была для вас интересной и окажется полезной для вашего исследования перед началом работы с животными. Мы настоятельно рекомендуем использовать старые или неиспользованные образцы для тренировки, чтобы определить соответствующую степень тяжести ваших экспериментов, варьируя длину лигатуры, толщину иглы и количество проколов.

С учетом сказанного, до свидания.