May 7th, 2011
Мышиной модели слепой кишки перевязки и проколы, как ценным инструментом для изучения человеческих сепсиса.
Здравствуйте, меня зовут Мигель Тоскано из лаборатории доктора Дены на кафедре микробиологии и гемологии в Университете Темпл. Сегодня мы покажем вам, как настроить модель утверждения и прокола iCal в штамме мышей C 57 Black Seas. Мы используем эту модель в нашей лаборатории для имитации сепсиса человека.
По сути, эта модель заключается в проколе сыворотки, что позволяет высвобождению калового материала в брюшную полость для производства полимикробного сепсиса, тем самым вызывая усиленный иммунный ответ. В этой модели необратимо повреждаются многие органы и различные типы клеток. Что в итоге может стать причиной гибели животного.
Итак, давайте начнем. Обезболивание мыши. Первым этапом является обезболивание животного путем внутрибрюшинного введения.
Смесь, один к одному, кетомина и ксилазина. Чтобы мышь не укусила вас, чтобы не причинить ей вреда, мы должны схватить мышь за хвост одной рукой. Другой рукой мы прижимаемся к полу.
Затем мы можем схватить мышь с затылка, а затем перевернуть животное на спину, чтобы обнажить живот. С помощью инсулинового шприца 29 калибра мы вводим от 20 до 30 микролитров анестезии в брюшную полость. Подготавливая мышь к процедуре, возьмитесь за заднюю часть мыши и побрейте ее живот, надавливая на хвост и/или ногу мыши.
Проверяем, чтобы мышь не была чувствительна к боли, затем дезинфицируем живот. Сначала протереть раствором Бетадина, затем протереть изопропиловым спиртом салфеткой не менее одной минуты. Практика лапаротомии Чтобы отработать лапаротомию, мы приподнимаем кожу в середине живота с помощью щипцов и делаем небольшой разрез длиной около одного сантиметра.
Затем поднимите промежность и сделайте еще один небольшой разрез, чтобы обнажить брюшную полость. С помощью изогнутых щипцов удерживайте перитонеальную оболочку. Определите и обнажите слепую кишку, пропустив ее через перитонеальную оболочку.
Поместите его над животом. Сейчас настал момент перевязки. Это немаловажный фактор.
Для того, чтобы определить тяжесть модели, мы можем модулировать тяжесть процедуры. При распространении лигирования у мышей развивается более легкий сепсис. Если лигирование проводится ближе к концу слепой кишки, сепсис средней степени злокачественности - в середине и тяжелый сепсис - ближе к илеоцекальному клапану, тяжесть процедуры будет отражаться процентом смертности.
Никогда не перевязывайте илеоцекальный клапан. Теперь сделайте лигацию с помощью шелкового шва с двойным узлом, чтобы сделать его тугим, сделав прокол Удерживайте слепую кишку и осторожно сделайте прокол близко к месту перевязки и сделайте еще один прокол ближе к концу слепой кишки. Мембрана секума мягкая и очень легко перфорируется.
Используя иглы разной толщины и сделав одну или две перфорации, мы также можем модулировать тяжесть модели. Показанный здесь метод одинарного или двойного прокола является альтернативой классической сквозной и сквозной пункции. Преимущество использования метода одинарного или двойного прокола заключается в том, что можно лучше контролировать количество фекалий, выдавливаемых при их сжатии.
Удерживайте секум обоими пальцами и аккуратно выдавливайте слепую кишку, чтобы извлечь очень небольшое количество кала. Закрываем лапаротомию, затем приподнимаем брюшину и аккуратно помещаем обратно слепую кишку. В брюшной полости.
Будьте предельно осторожны, чтобы избежать случайных уколов слепой кишки С щипцами рекомендуется использовать щипцы большего размера. Сейчас самое время закрыть брюшную полость. При использовании шелкового шва очень важно, чтобы вы убедились, что он очень хорошо закрыт.
Начинаем с одной стороны раны, где завязываем узел. Продолжайте накладывать шов до другой стороны, пропуская шелк под петлю предыдущего прокола. Чтобы закрыть кожу, мы можем использовать зажимы для раны Mitchell или рефлекторные зажимы с помощью подходящего инструмента для закрытия зажимов.
Установите столько зажимов, сколько необходимо, чтобы убедиться, что рана закрыта. Реанимируйте мышей, вводя подкожно один миллилитр предварительно подогретого солевого раствора. С помощью иглы 25 калибра эта реанимационная мера вызовет гипердинамическую фазу сепсиса, завершив процедуру.
Поместите мышь под инфракрасный нагревательный свет или на грелку, пока мышь не оправится от анестезии. Обеспечьте кормом и водой пол клетки и наблюдайте за животными каждые восемь-12 часов на предмет признаков заболевания. Вводите бупренорфин подкожно для послеоперационной анальгезии.
Другим анальгетиком для использования является T.Tramadol. Признаками сепсиса, симптомами сепсиса являются лихорадка, вялость, пело, эрекция, диарея, стеснение и недомогание. У очень больных животных наблюдается сильное снижение температуры тела и они едва передвигаются, чтобы избежать страданий.
На этом этапе их следует усыпить, H.So именно так мы выполняем серповидное лигирование и пунктуальную модель. Надеемся, вам понравилась демонстрация этой процедуры и вы нашли ее очень полезной для ваших исследований, прежде чем начать исследование на животных. Мы настоятельно рекомендуем вам использовать старые или неиспользованные умы для обучения, чтобы установить соответствующую степень серьезности для ваших экспериментов, изменяя длину лигирования, толщину иглы и количество проколов.
С учетом сказанного, до свидания.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
В этой статье рассматривается модель лигирования и прокола слепой кишки у мыши, которая используется для изучения сепсиса у человека. Модель имитирует полимикробный сепсис путем введения калового материала в брюшную полость, что приводит к преувеличенному иммунному ответу и потенциальному повреждению органов.
The cecal ligation and puncture (CLP) model provides a reproducible, polymicrobial sepsis model that mirrors human pathophysiology, enabling target validation and mechanistic de-risking in early discovery. By reproducing both hyperdynamic and hypodynamic phases, it supports predictive confidence in therapeutic screening and translational biomarker identification. This model aids in assessing drug efficacy across disease stages, reducing late-stage failure risk in sepsis-related programs.
The CLP model fits within the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, particularly for immunomodulatory agents.