Внутрипросветный средней мозговой артерии (MCAO) Модель развития ишемического инсульта с лазерной допплеровской флоуметрии Руководство у мышей

В этой видеостатье мы представляем модель ишемического инсульта, известную как окклюзия средней мозговой артерии или MCAO. При оригинальном методе окклюзии МКА с помощью coi притупленный шов продвигается через общую сонную артерию для окклюзии средней мозговой артерии. Этот метод приводит к постоянной окклюзии общей сонной артерии.

Методическая модификация longa позволяет получить доступ к средней мозговой артерии через наружную сонную артерию. Этот метод сохраняет функцию общей сонной артерии и ее дистальное кровообращение среди экспериментальных моделей ишемического инсульта. Модель окклюзии внутрипросветной нити средней артерии у крыс и мышей является одной из наиболее часто используемых моделей с момента ее первого описания на крысах, в настоящее время опубликовано несколько модификаций исходной модели, поскольку модификация является наиболее заметным вариантом.

Эта модель является менее инвазивной и позволяет легко выполнять как постоянную, так и транзиторную ишемию контролируемым образом. Модель окклюзии средней мозговой артерии с внутрипросветной нитью включает в себя введение моноволокна во внутреннюю сонную артерию и продвижение ее до тех пор, пока она не блокирует приток крови к средней мозговой артерии. Данная модель обеспечивает воспроизводимость инфарктов средней полосы артериальной артерии, а также позволяет проводить реперфузию после втягивания шва.

Размер инфаркта, по-видимому, зависит от многих специфических факторов в этой технике, таких как диаметр шовной нити, покрытие шовной нити силиконом или полиоллизином или длина введения самой нити. В этом видео мы покажем, как выполнить эту модель поэтапно, а также как избежать многих потенциальных ловушек и недостатков, связанных с использованием этого метода. Для окклюзии MCA будет использован нейлоновый шов из моноволокна 7.0.

Конец нейлонового шва должен быть затуплен при непосредственной близости к источнику тепла. Затупленный конец должен быть прямым и гладким и примерно от одного до двух миллиметров в длину. После затупления конца шов следует обрезать до общей длины примерно от 11 до 13 миллиметров.

Затупленный кончик шовной нити обмакивают в силикон до тех пор, пока не покрывают три-четыре миллиметра конца и дают ему высохнуть. Все этапы подготовки швов должны проводиться в стерильных условиях. После взвешивания мыши в индукционной камере индуцируется анестезия 4%изофтором.

Мышь кладут в положение лежа на марлевую салфетку, лежа на термоодеяле. Для поддержания температуры тела на уровне 37 градусов анестезия поддерживается во время процедуры с помощью маски для лица. Выбритую голову очищают спиртом, бетадином и снова спиртом.

Разрез в один сантиметр делается на коже, чтобы обнажить кальварию на один миллиметр сзади и на пять миллиметров латеральнее bgma. Гибкий микронаконечник прикреплен перпендикулярно поверхности правого теменного черепа для контроля кровотока. На территории МКА с помощью лазерной доплеровской проточной съемки.

Возвращая животное в лежачее положение на спине, ножницами между кистью и челюстью делают разрез шеи по средней линии. Парные подчелюстные железы тупо разделены, чтобы обнажить нижележащие структуры, желудочную мышцу, грудинную сосцевидную мышцу colleto и трахею. Треугольник, втягивающий эти структуры, и дальнейшее рассечение обнажают общую сонную артерию, блуждающий нерв и внутреннюю яремную вену.

Также можно увидеть затылочную артерию, исходящую из области бифуркации. В методе COE проксимальная общая сонная артерия тщательно отделяется и изолируется от блуждающего нерва. Вокруг общей сонной артерии накладываются три шва с рыхлым воротником.

Особое внимание следует уделить тому, чтобы блуждающий нерв не был зажат в А-образном шве. Наружная сонная артерия идентифицируется и изолируется. Затем его прижигают на два-три миллиметра и перегоняют до раздвоения.

Самый проксимальный шов воротника на общей сонной артерии затягивается, чтобы навсегда перекрыть кровоток. Окклюзия потока подтверждается падением исходных значений кортикальной перфузии примерно на 50%. Свободные концы шва обрезаются. Зажим для сосудов помещается непосредственно перед общей бифуркацией сонной артерии, чтобы избежать ретроградного кровотока.

Затем между зажимом для сосуда и лигатурой с помощью микроножниц проводится артериология. Это позволяет ввести притупленный при нагревании шов в общую сонную артерию и продвигаться вперед до тех пор, пока он не достигнет зажима сосуда. Два оставшихся свободных швов воротника аккуратно затягиваются, чтобы избежать утечки обратного потока через общую сонную артерию.

Сосудистый зажим извлекается, и притупленный шов аккуратно продвигается во внутреннюю сонную артерию. До тех пор, пока на допплеровском считывании не будет ощущаться умеренное сопротивление, результаты будут снижаться примерно на 80% по сравнению с базовым уровнем. Два швов воротника надежно затянуты, чтобы избежать ретроградного кровотечения.

Теперь мышь можно оставить в состоянии ишемии на соответствующий период времени. Для имитации реперфузии окклюзионные швы удаляются через соответствующий интервал. Скачок в показаниях допплерографии указывает на то, что коллатеральный кровоток восстановился.

Шов полностью отводится, а два воротниковых шва полностью затягиваются и обрезаются длинным методом. Для окклюзии средней мозговой артерии можно использовать другой путь. Во-первых, наружная сонная артерия должна быть идентифицирована, изолирована и прижжена как можно дальше друг от друга, оставляя достаточную длину для наложения швов.

Затем наружная сонная артерия разделяется, а ее ветви прижигаются и обрезаются. Культя наружной сонной артерии втягивается. Коддли Два швов с рыхлым воротником подготавливаются вокруг проксимального отдела внутренней сонной артерии, чуть выше общей бифуркации сонной артерии.

Общая сонная артерия временно закрывается сосудистым зажимом. Это приводит к снижению значений перфузии примерно на 50% дистальнее бифуркации. Внутренняя сонная артерия аналогичным образом пережимается сосудистым зажимом, и артериальная ототомия выполняется ближе к концу втянутой культи наружной сонной артерии с помощью микроножниц.

Термически притупленный шов вводится через артериологию и наружную сонную артерию и продвигается до тех пор, пока не достигнет зажима сосуда на внутренней сонной артерии. Два ослабленных шва воротника вокруг проксимального отдела внутренней сонной артерии аккуратно затягиваются, чтобы избежать рефлюксного кровотока, хотя этого недостаточно, чтобы травмировать артериальную стенку. Затем сосудистый зажим удаляется из внутренней сонной артерии, тройная нёбная артерия расходится от внутренней сонной артерии.

Поскольку шов является мягким, необходимо соблюдать особую осторожность, чтобы избежать перенаправления в него. Наблюдается второе падение на доплеровском считывании. Когда тупой шов достигает средней мозговой артерии, воротниковые швы необходимо снова затянуть, чтобы избежать ретроградного кровотечения.

Теперь мышь можно оставить в состоянии ишемии на соответствующий период времени. Втягивание притупленного шва восстанавливает кровоток, о чем свидетельствует подъем на допплеровском мониторе. После полного снятия швов культя наружной сонной артерии прижигается.

Для предотвращения послеоперационного кровотечения необходимо соблюдать осторожность для сохранения проходимости общей сонной артерии. Затем швы воротника на проксимальном отделе внутренней сонной артерии ослабляются и обрезаются, а зажим на общей сонной артерии удаляется для восстановления кровотока. Это указывается вторым прыжком на показаниях Доплера.

Как только мышь приходит в сознание, неврологические дефициты могут быть оценены в различные моменты времени в соответствии с пятибалльной шкалой. Нулевой балл не обозначает, что наблюдаемый неврологический дефицит равен одному, соответствующему легкому инсульту, свидетельствует неспособность продлить четыре ПА на противоположной стороне инсультного полушария. Оценка в два балла, соответствующая умеренному гребку, подтверждается вращением в направлении, противоположном направлению ударного полушария.

Оценка в три балла, соответствующая тяжелому инсульту, подтверждается падением в направлении, противоположном ударному полушарию. Мышь с оценкой A четыре не будет демонстрировать спонтанную двигательную активность для получения измерения объема удара. Мозг удаляется из черепа в подходящий момент времени.

После реперфузии мозг помещают в матричный срез и весь мозг разрезают коронально. С интервалом в два миллиметра мозжечок и обонятельные луковицы отбрасываются. Каждый двухмиллиметровый срез погружается в раствор 2%TTC на 20 минут при температуре 37 градусов в темноте.

Цифровые изображения участков мозга показывают, что ТТС окрашивает живую ткань в красный цвет и оставляет инфарктированную ткань, бледно-белую для каждого участка. Область инфаркта обозначена здесь как одна. Площадь всего ипсилатерального полушария, обозначенная здесь как два, и площадь контралатерального полушария, обозначенная здесь как три, измеряются с помощью программы Image J, измерившей площади для всех сечений, независимо от объемов, которые можно рассчитать путем сложения площади значений и умножения на толщину среза.

Чтобы найти объем инфаркта, скорректированный на отек, используется следующая формула. Этот объем выражается в процентах от ипсилатерального полушарного объема. Модель MCO обеспечивает воспроизводимые результаты.

Тем не менее, некоторые процессуальные факторы могут помешать выполнению техники. Силиконовое покрытие на конце шовной нити важно, потому что оно разглаживает поверхность шовной нити и снижает риск истирания эндотелия или перфорации сосуда. Кроме того, шовное покрытие может быть модифицировано в соответствии с различными экспериментальными целями.

Покрытие на расстоянии более трех-четырех миллиметров от кончика окклюзирует артерию проксимальнее средней мозговой артерии, увеличивая общий объем удара. Цветные швы следует накладывать с осторожностью, чтобы не ограничивать блуждающий нерв, и аккуратно завязывать, чтобы стенка AAL не травмировалась. Температура тела мыши может влиять на степень инфаркта, поэтому она должна оставаться стабильной на протяжении всей процедуры.

Мы надеемся, что просмотр этого видео поможет вам сориентироваться в хирургическом процессе и послужит надежной отправной точкой для ваших собственных экспериментов. Спасибо за просмотр и удачи в ваших экспериментах.