Энциклопедия экспериментов JoVE
Биология
0 просмотров • 3:53 мин. • April 30th, 2023
Во-первых, чтобы приготовить гранулу, введите силиконовый медицинский клей на один конец предварительно вырезанного куска силиконовой трубки. Затем плотно упакуйте дигидротестостерон или кристаллический порошок ДГТ внутрь трубки. Затем с помощью медицинского клея и силикона загерметизируйте другой конец трубки. Гранулы должны иметь равное количество силикона на каждом конце без пузырьков. Поместите гранулы в солевой раствор перед тем, как вставить их в самку мыши.
На мыши, находящейся под наркозом, используйте ватный тампон с дезинфицирующим средством, чтобы очистить выбритую хирургическую область. Сделайте небольшой надрез через кожу возле шеи. С помощью трохара проделайте туннель под кожей в направлении носа мыши. Вставьте гранулу в туннель. Наконец, заклейте разрез хирургическим клеем. Гранула высвобождает постоянную дозу ДГТ и заменяется каждые 4 недели, чтобы обеспечить длительное воздействие препарата.
Для приготовления гранул дигидротестостерона или ДГТ используйте лезвие бритвы, чтобы разрезать 15-миллиметровый кусок силиконовой трубки, и используйте 3-миллилитровый шприц, оснащенный затупленной иглой 20-го калибра, чтобы ввести от 2 до 5 миллиметров медицинского адгезивного силикона в один конец трубки. Дайте трубке высохнуть в течение ночи и проверьте наличие пузырьков воздуха на герметичном конце.
Надев соответствующие средства индивидуальной защиты, насыпьте порошок DHT в пластиковую лодку для взвешивания в проточном капюшоне. Вдавите открытый конец тюбика с клейкой крышкой в порошок. С помощью большой выпрямленной скрепки утрамбуйте порошок в трубке до тех пор, пока DHT не достигнет соответствующей экспериментальной глубины. Затем запечатайте открытую сторону трубки силиконом на ночь.
На следующее утро разрежьте каждую герметичную сторону, чтобы получить 2-миллиметровую длину силикона с обеих сторон DHT и без контрольных гранул DHT. Затем храните гранулы в 50-миллилитровой конической тубе, обернутой фольгой, при комнатной температуре до 3 месяцев.
Для создания модели мыши с СПКЯ уравновесьте до 20 ДГТ или контрольные гранулы в отдельных 50-миллилитровых конических пробирках, содержащих 30 миллилитров 0,9% физиологического раствора, в течение 24 часов при 37 градусах Цельсия. На следующий день подтвердите отсутствие реакции на защемление пальца ноги у 2-месячной самки мыши, находящейся под наркозом, и используйте стерильную марлю для введения последовательных скрабов с повидон-йодом и 70% этанолом в операционную область.
Далее сделайте 5-миллиметровый разрез через кожу возле шеи и с помощью трохара 10-го калибра сделайте 15-миллиметровый тоннель в ростральном направлении. С помощью трохара введите гранулу дорсально в туннель и заклейте разрез хирургическим клеем. Вручную приблизьте края раны щипцами и легкими движениями кистью нанесите 3 слоя тонкой пленки жидкого клея на расстоянии 1 сантиметра с каждой стороны от прилегающих краев раны.
Затем поместите мышь одну в клетку на грелку с контролем до полного лежания, заменяя гранулу каждые 4 недели для поддержания постоянного уровня воздействия андрогенов.