Функционализированное нацеливание на наночастицы рака яичников: метод содействия поглощению наночастиц контрастного вещества с конъюгированной фолиевой кислотой клетками рака яичников

Рецепторы фолиевой кислоты представляют собой мембраноассоциированные гликопротеины, сверхэкспрессируемые большинством клеток рака яичников. Использование этих рецепторов позволяет целенаправленно доставлять диагностические наночастицы в раковые клетки.

Начните с суспензии желаемых конъюгатов контрастного вещества с наночастицами фолиевой кислоты. Добавьте эту суспензию наночастиц в адгезивную культуру клеток рака яичников. Инкубируйте культуру в течение нужного временного промежутка.

Функционализированная наночастицами фолиевая кислота помогает распознавать фолатные рецепторы, экспрессируемые на раковых клетках, способствуя избирательному связыванию конъюгатов наночастиц с клетками. Впоследствии плазматическая мембрана инвагинирует, способствуя поглощению клетками и накоплению наночастиц.

Соберите раковые клетки. Затем центрифугируйте для отделения клеток от надосадочной жидкости, содержащей любые несвязанные наночастицы. Выбросьте надосадочную жидкость и ресуспендируйте клетки, содержащие наночастицы, в подходящий буфер для последующих применений.

Во-первых, смешайте наночастицы сульфида меди, покрытые фолиевой кислотой, в нужной концентрации в свежих средах RPMI. Добавьте этот раствор наночастиц в каждую лунку подготовленного 24-луночного планшета, который содержит клетки SKOV-3 в концентрации 400 микрограмм на миллилитр. Инкубировать при температуре 37 градусов Цельсия с 5% углекислым газом в течение двух часов.

После этого трипсинизируйте клетки 0,5 миллилитрами 0,25% трипсина и ЭДТА. Чтобы нейтрализовать трипсин, добавьте не менее 1 миллилитра полной питательной среды RPMI 1640, не содержащей фолиевой кислоты, и центрифугируйте клетки при 123 х г в течение шести минут. Чтобы промыть клетки, удалите надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте клетки в 2 миллилитрах PBS и центрифугируйте при 123 x g в течение шести минут. Повторите этот шаг промывки дважды, чтобы удалить все несвязанные наночастицы.

Затем повторно суспендируйте клетки с помощью от 1 до 2 миллилитров 2% раствора Tween в PBS. Подсчитайте клетки с помощью гемоцитометра и Трипана Блю. Разведите клетки в растворе 2% Tween и PBS до выбранной концентрации для обнаружения.