Проксимальная культуральная система: метод культивирования in vitro для изучения паракринной передачи сигналов между клетками

При паракринной передаче сигналов клетки производят и выделяют сигнальные молекулы, которые вызывают реакцию в соседних клетках. Чтобы имитировать паракринную сигнализацию, начните с приготовления суспензий одиночных клеток раковых клеток яичников и мезотелиальных клеток в соответствующей среде.

Далее возьмите инвертированную пористую пленчатую вставку в стерильную чашку для посева. Пипетируйте суспензию раковых клеток на нижнюю поверхность мембраны вставки, чтобы сформировать жидкий купол. Инкубируйте, чтобы позволить клеткам успокоиться и прикрепиться к мембране.

Переверните вкладыш, чтобы слить жидкость. Перенесите вкладыш в чашку для свежей культуры, содержащую питательную среду для питания раковых клеток, прилипших к нижней поверхности мембраны. Теперь добавьте суспензию мезотелиальных клеток в колодец для вставки. Инкубируйте клетки, чтобы позволить им прилипнуть к противоположной стороне мембраны, отрицая любой прямой контакт между двумя типами клеток.

Во время культивирования оба типа клеток секретируют сигнальные факторы. Эти молекулы диффундируют через пористую мембрану по направлению к соседним клеткам. Они связываются со специфическими клеточными рецепторами и индуцирую