Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 3:20 мин. • April 30th, 2023
Брюшная полость – это пространство между брюшной стенкой и слизистой оболочкой внутренних органов. Для внутрибрюшинной инъекции начните с удержания живой мыши за область шеи таким образом, чтобы голова мыши наклонялась вниз, обнажая брюшную полость.
Фиксация мыши ограничивает ее движения и смещает органы брюшной полости в сторону диафрагмы, предотвращая случайное повреждение органов во время введения иглы.
Рядом со средней линией на животе мыши, в правом нижнем квадранте, находится точка для введения иглы. Этот участок предотвращает риск прокола слепой кишки.
Далее возьмите шприц, содержащий одноклеточную суспензию клеток рака яичников. Введите иглу в выбранную точку на глубину примерно полсантиметра, чтобы проникнуть как раз в наружную брюшную стенку. Наконец, медленно вводите суспензию раковых клеток. Это обеспечивает эффективное распределение клеток в брюшной полости.
Верните мышь в клетку и следите за ростом опухоли. Ткани в брюшной полости могут высвобождать специфические хемотаксические молекулы, которые привлекают раковые клетки, что приводит к их миграции и колонизации, что в конечном итоге способствует развитию опухоли.
Загрузите в шприц 500 микролитров флуоресцентно помеченной суспензии одиночных клеток. Затем поместите шприц в иглу 25 калибра со стерильным колпачком, чтобы уменьшить сдвиг клеток перед инъекцией. Удерживая мышку другой рукой, возьмите мышку вверх за загривок и придерживайте хвост с помощью ладони и указательного пальца. Затем зафиксируйте левую заднюю ногу между безымянным и мизинцем. Чтобы избежать травмирования органов брюшной полости, хорошо удерживайте мышь, чтобы она не могла двигаться во время инъекции.
Представьте себе линию через брюшную полость и найдите точку с правой стороны животного и близко к средней линии. Точка входа находится краниально и немного медиально от последнего соска. Приготовьтесь ввести иглу с правой стороны мыши, чтобы избежать слепой кишки и снизить риск прокола кишечника. Введите иглу в нижнюю боковую область брюшка мыши на глубину примерно 0,5 сантиметра. Потяните поршень назад, чтобы убедиться, что игла не проникла в кровеносный сосуд или другие органы брюшины.
Если жидкость не отсасывается, введите образец под медленным постоянным давлением. Затем извлеките иглу и верните мышь в клетку. Не закрывайте шприц крышкой перед утилизацией в контейнере для острых предметов.