Получение первичных клеток рака яичников из твердых образцов: метод культивирования эпителиальных клеток рака яичников из образцов опухолей яичников

Эпителиальные клетки, присутствующие на внешней поверхности яичника, могут подвергаться злокачественной трансформации в раковые клетки, которые могут перерастать в опухоли яичников.

Чтобы выделить эти эпителиальные клетки рака яичников или ЭОК, начните с взятия образца опухоли яичника и измельчите его на мелкие кусочки. Переложите измельченные кусочки в пробирку, содержащую буфер для пищеварения, дополненный нужным ферментом протеаза.

Эти протеазы разрушают белки внеклеточного матрикса в ткани, высвобождая клетки EOC, эритроциты и несколько диссоциированных фибробластов в суспензию.

Процедите клеточную суспензию через ситечко, чтобы отделить взвешенные отдельные клетки от недиссоциированных кусочков ткани. Центрифугируйте суспензию для гранулирования клеток EOC, эритроцитов и фибробластов. Откажитесь от надосадочной жидкости, содержащей фермент.

Ресуспендируйте клеточную гранулу в эпителиальную среду для роста и перенесите ее в чашку для культивирования. Инкубируйте культуру, чтобы позволить клеткам и фибробластам EOC прикрепиться к основанию чашки, в то время как эритроциты плавают в среде.

Удалите взвешенные эритроциты, освежив среду. Со временем среда способствует избирательному росту клеток EOC над фибробластами с образованием монослоя первичных клеток рака яичников.

Соберите образец из операционной и транспортируйте его на льду в лабораторию. Все еще находясь внутри транспортируемого контейнера, поместите образец в колпак биологической безопасности. Перенесите образец из конической пробирки объемом 50 миллилитров в чашку Петри размером 60 на 60 миллиметров, содержащую 10 миллилитров свежего ледяного PBS.

Далее с помощью стерильного лезвия бритвы дополнительно разрежьте образец на кусочки размером 2 миллиметра или мельче. Затем обработайте DMEM диспазой II в 15-миллилитровой конической тубе. Переложите измельченные салфетки в пробирку со смесью DMEM dispase II. Затем инкубируйте образец при 5% углекислом газе и 37 градусах Цельсия в течение 30 минут. Вручную перемешивайте клеточную кашу каждые пять минут, чтобы обеспечить оптимальное пищеварение.

После инкубации передайте клеточную суспензию через сетчатое сетчатое сетчатое сетчатое ситечко, расположенное поверх конической трубки объемом 50 миллилитров. Аккуратно надавите на сетку с помощью поршня шприца. Отбросьте всю недиссоциированную ткань, оставшуюся поверх сетки, и соберите полученную клеточную суспензию в 50-миллилитровую стерильную коническую пробирку.

Затем центрифугируйте коническую пробирку при температуре 320 x g в течение семи минут при температуре 4 градуса Цельсия. Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клеточную гранулу в 10 миллилитрах DMEM, содержащем 10% FBS и 1% PS. Затем перенесите клеточную суспензию в чашку Петри и инкубируйте суспензию при 5% углекислом газе и 37 градусах Цельсия. Смените среду через 24 часа после первоначального осаждения, чтобы удалить клеточный мусор и большую часть эритроцитов, присутствующих в культуре.

Наконец, меняйте среду каждые три дня в течение следующих двух недель, после чего культуры первичных клеток EOC готовы к последующему применению.

• Ovarian Tumor Sample - The tissue of origin from an ovarian tumor, used for lab analysis.
• Epithelial Ovarian Tumor Sample - A subtype of ovarian tumor sourced from epithelial cells.
• Ovarian Cancer Sample - Biopsy or excision sample of an ovarian malignant growth.
• DMEM - Standard cell culture medium used for growing mammalian cells.
• FBS - Fetal Bovine Serum, a supplement used in cell cultures to promote growth and survival.

• Introduce Ovarian Tumor Sample – The sample retrieved from patients, used for cellular analyses (e.g., epithelial ovarian tumor sample).
• Key Concepts – Overview of sample processing techniques (e.g., mincing, digestion).
• Underlying Mechanisms – Dissecting the biochemical processes during sample handling, e.g., enzymatic digestion and cell plating.
• Connect to Experiment – The cultivation of epithelial ovarian cancer cells paves the way for further cancer research.

• What is an ovarian tumor sample and how to process it?
• How does the sample processing facilitate downstream applications?
• Why does cell slurry need to be strained and centrifuged?

• Practical Applications – Ovarian cancer research and possible therapeutic development (e.g., drug screening).
• Industry Impact – Used in biomedical research and pharmaceutical industry (e.g., cancer drug development).
• Societal Importance – Advances in ovarian cancer treatment can increase survival rates (e.g., patient prognosis).
• Link to scientific Advancements – Adoption of this methodology contributes to cancer research advancements.