Анализ мезотелиального клиренса: метод in vitro для количественной оценки способности инвазионных сфероидов рака яичников в монослои мезотелиальных клеток

Во время метастазирования рака яичников злокачественные клетки отделяются от первичного опухолевого очага и начинают циркулировать в брюшной полости. Эти клетки затем могут образовывать кластеры или сфероиды, которые прилипают к монослою мезотелиальных клеток, выстилающему брюшную полость. По мере роста опухоли она очищает нижележащие мезотелиальные клетки, чтобы облегчить инвазию.

Чтобы смоделировать мезотелиальный клиренс, начните с посева мезотелиальных клеток, экспрессирующих зеленый флуоресцентный белок или GFP, в чашку для культуры со стеклянным дном, покрытую фибронектином. Покрытие из фибронектина обеспечивает матрицу, способствующую прикреплению клеток. Инкубируйте чашку, чтобы мезотелиальные клетки распространились и образовали монослой.

Затем перенесите суспензию сфероидов клеток рака яичников, экспрессирующих красный флуоресцентный белок, на мезотелиальный монослой. Визуализируйте культуру в течение длительного времени с помощью покадровой флуоресцентной микроскопии. Краснофлуоресцентные сфероиды осядут и прикрепятся к зелено-флуоресцентному мезотелиальному монослою.

Раковые клетки оказывают воздействие на мезотелиальные клетки, нарушая клеточные соединения и изменяя це