Анализ органоидов предстательной железы: метод культивирования ex vivo на основе матричного геля для изучения дифференцировочной способности эпителиальных клеток предстательной железы

Эпителий предстательной железы в основном состоит из клеток базального эпителия и эпителия просвета. Монослой базальных клеток образует внешнюю оболочку железы и поддерживает выживание люминальных клеток. И наоборот, люминальные клетки выстилают просвет и секретируют белки, специфичные для простаты.

Чтобы изучить дифференцировку эпителия предстательной железы ex vivo, начните с суспензии клеток базального эпителия предстательной железы. Смешайте суспензию с охлажденной матрицей базальной мембраны в нужном соотношении. Пипетируйте эту смесь рядом с основанием внутренней стенки клетки-репеллентной культуральной пластины. Закрутите пластину, чтобы смесь образовала кольцо по окружности лунки.

Инкубируйте пластину, чтобы матрица затвердела. Дополните культуру предпочтительной средой. Факторы роста в среде поддерживают пролиферацию базальных эпителиальных клеток. В то же время, репеллентная природа чашки для культивирования предотвращает любое прикрепление клеток, стимулируя клетки к образованию трехмерных сфероидов внутри матрицы.

Со временем сфероиды развивают просветы, окаймленные многослойным эпителием. Базальные эпителиальные клетки, выстилающие просвет, в конечном итоге дифференцир