Экстракция лизата белка: метод лизиса органоидов для сбора клеточных белков

Лизат клеток, или жидкость, содержащая лизированное содержимое клеток, находит применение в последующих процессах, таких как экстракция и анализ белка. Изучение этих дробей позволяет получить информацию о характеристиках и функциях клеток.

Чтобы получить лизаты органоидных белков, начните с культуры органоидов, выращенных в нужной матрице базальной мембраны. Удалите отработанную питательную среду из чашки. Добавьте на матрицу теплые среды, содержащие протеазы. Пипеткой несколько раз выбить матрицу из чашки.

Инкубируйте смесь. Протеолитические ферменты в среде разрушают матрицу и высвобождают органоиды в раствор. Центрифугируйте образец для отделения органоидов от надосадочной жидкости, содержащей фермент

.

Ресуспендируйте органоидную гранулу в подходящем буфере для лизиса белка. Инкубируйте образец. Детергенты в буфере разрушают клеточные мембраны органоидов, высвобождая внутриклеточное содержимое в раствор. В то же время белковые ингибиторы в буфере инактивируют любые высвобождающиеся ферменты протеазы и фосфатазы, предотвращая деградацию их белков субстрата.

Далее обработайте смесь ультразвуком, чтобы нарушить работу клеток полностью. Ядерная оболочка разрывает и высвобождает ядер