Отбор проб одиночных клеток с помощью микродиссекции с лазерным захватом: метод забора клеток-мишеней из гетерогенной клеточной популяции
Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 2:30 мин. • April 30th, 2023
Микродиссекция с лазерным захватом позволяет получить одну клетку-мишень из клеточной смеси, приготовленной на предметном стекле. Начните с того, что возьмите на его поверхность подходящее предметное стекло, покрытое УФ-проницаемой, биохимически инертной мембраной. Подвергните предметное стекло воздействию ультрафиолетового света, чтобы сделать его более гидрофильным для лучшей адгезии клеток.
Соберите предметное стекло в цитоцентрифугу. Добавьте клеточную суспензию на воронку аппарата. Цитоцентрифуга позволяет центробежной силе концентрироваться и осаждать монослой клеток на небольшой площади на предметном стекле. Дайте предметному стеклу высохнуть на воздухе.
Поместите предметное стекло стороной вверх под лазерный микродиссекционный микроскоп. Определите область, окружающую интересующую ячейку. Теперь сфокусируйте лазерный луч, чтобы рассекать область, содержащую клетку-мишень, вместе с мембранным покрытием. Затем расфокусируйте лазерный луч и импульсируйте его для создания давления. Эта энергия катапультирует микрорасчлененную область в перевернутую крышку предварительно собранной сборной трубки, содержащей буфер, расположенный над предметным стеклом.
Достаньте пробирку и закрой
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео