Отбор проб одиночных клеток с помощью микродиссекции с лазерным захватом: метод забора клеток-мишеней из гетерогенной клеточной популяции

Микродиссекция с лазерным захватом позволяет получить одну клетку-мишень из клеточной смеси, приготовленной на предметном стекле. Начните с того, что возьмите на его поверхность подходящее предметное стекло, покрытое УФ-проницаемой, биохимически инертной мембраной. Подвергните предметное стекло воздействию ультрафиолетового света, чтобы сделать его более гидрофильным для лучшей адгезии клеток.

Соберите предметное стекло в цитоцентрифугу. Добавьте клеточную суспензию на воронку аппарата. Цитоцентрифуга позволяет центробежной силе концентрироваться и осаждать монослой клеток на небольшой площади на предметном стекле. Дайте предметному стеклу высохнуть на воздухе.

Поместите предметное стекло стороной вверх под лазерный микродиссекционный микроскоп. Определите область, окружающую интересующую ячейку. Теперь сфокусируйте лазерный луч, чтобы рассекать область, содержащую клетку-мишень, вместе с мембранным покрытием. Затем расфокусируйте лазерный луч и импульсируйте его для создания давления. Эта энергия катапультирует микрорасчлененную область в перевернутую крышку предварительно собранной сборной трубки, содержащей буфер, расположенный над предметным стеклом.

Достаньте пробирку и закройте крышку. Вращайте трубку, чтобы поднести буфер, содержащий одну целевую ячейку, ко дну пробирки. Охладите трубку до дальнейшего анализа.

Для лазерной микродиссекции цитоцентрифугируйте все 300 микролитров клеточной суспензии на предметное стекло с мембранным покрытием при плотности 300 x g в течение 5 минут. Затем поместите предметное стекло с мембранным покрытием на микроскоп, способный проводить лазерную микродиссекцию. Далее пипетку 4,5 микролитра мастера лизиса клеток смешать в колпачок 0,2-миллилитровой ПЦР-пробирки.

Поместите колпачок над образцом и соберите одну клетку с помощью лазерной микродиссекции. Сразу после этого проверьте наличие изолированных клеток в ПЦР-колпачке. Извлеките ПЦР-пробирку из лазерного микроскопа для микродиссекции и закройте пробирку. Соберите всю жидкость на дно трубки с помощью короткого отжима.

• Microdissection - The process of extracting a single cell from a mixed cell population.
• Cytocentrifuge Technique - A method which uses centrifugal force to focus cells onto a slide.
• Target Capture - The retrieval of a specific designated cell from a slide.
• Laser Capture Microdissection Microscope - An instrument purposed to select and extract a target cell from a tissue section.
• Cytocentrifugation Meaning - The connotation of concentrating and depositing cells on a slide using centrifugal force.

• The concept of microdissection entails selecting and isolating a specific cell from a mix (e.g., target capture).
• Cytocentrifuge technique is a process employing centrifugal force to deposit cells on a slide (e.g., cytocentrifugation).
• Laser capture microdissection microscope allows for precise selection and extraction of target cells (e.g., microdissection).
• In context with the experiment, these principles are implemented to isolate a single target cell on a slide for further analysis.

• What does microdissection entail and what role does target capture play in it?
• From the provided information, can you explain the cytocentrifuge technique?
• What is the use of a laser capture microdissection microscope in the process?

• Microdissection has practical applications in cell study and genome research (e.g., biotechnology).
• These techniques contribute to the clinical and research aspects of healthcare industry (e.g., pathology).
• Isolation of specific cells has broader implications for disease understanding and treatment (e.g., cancer research).
• Advancements in efficient cell isolation techniques drive scientific innovation in cell and genome studies.