Внутрипростатическая инъекция раковых клеток: техника доставки раковых клеток для создания мышиной модели ортотопического рака предстательной железы

Интрапростатическая инъекция ортотопической опухоли доставляет опухолевые клетки, соответствующие гистотипу ткани предстательной железы, непосредственно в предстательную железу животного-реципиента.

Для начала подготовьте мышь-самца, находящегося под наркозом, в положении лежа на спине. Сделайте разрез живота по средней линии и рассеките внутреннюю мускулатуру, чтобы обнажить брюшную полость. Найдите одну из передних долей предстательной железы. Эти доли предстательной железы прикрепляются к меньшей кривизне семенных пузырьков и лежат близко к мочевому пузырю.

Теперь введите охлажденную суспензию клеток рака предстательной железы, смешанную с желаемой матрицей базальной мембраны, в длинную ось передней доли предстательной железы. Обеспечьте полную доставку клеточной суспензии и аккуратно втяните иглу. Дайте матрице затвердеть и вживите в нее клетки.

Впоследствии поместите долю простаты вместе с семенным пузырьком обратно в брюшную полость. Зашить хирургический разрез. Дайте мыши восстановиться. Еженедельно проверяйте мышь, чтобы наблюдать за ростом ортотопических опухолей в передней доле предстательной железы.

После подтверждения отсутствия реакции на щипывание пальца ноги нанесите мазь на глаза мыши и сбрейте всю шерсть с живота животного. Простерилизуйте открытые участки кожи с помощью трех раундов хирургического скраба с использованием стерильных неадгезивных салфеток, за которыми следуют стерильные спиртовые салфетки. Когда кожа высохнет, поместите мышь в лежачем положении на чистую поверхность над грелкой прямо под объективом чистого хирургического микроскопа и накройте животное стерильной простыней с небольшим отверстием, вырезанным над животом.

Сделайте 1-сантиметровый разрез на наружной поверхности кожи и внутренней мускулатуре живота по средней линии живота, выше пениса и препуциальных желез. Найдите одну из двусторонних семенных пузырьков и прикрепленных к ней передних долей предстательной железы, которые обычно находятся сзади, латерально и немного выше мочевого пузыря. Попросите ассистента смешать раствор матрицы раковых клеток Myc-CaP с щадящим пипетированием и медленно аспирировать 30 микролитров клеток в иглу 28 калибра, прикрепленную к шприцу объемом 50 микролитров.

Затем с помощью тканевых щипцов Грефе аккуратно приподнять кончик одного семенного пузырька, чтобы создать натяжение ткани, не прокалывая пузырь, и осторожно ввести скос иглы параллельно длинной оси передней доли предстательной железы. Медленно вводите весь объем клеток в долю с последующим медленным втягиванием иглы для предотвращения утечки.

Успешная инъекция будет проявляться по набуханию внутренней доли предстательной железы. Осторожно и неуклонно поддерживайте семенной пузырь и введенную долю предстательной железы за пределами мыши в течение примерно 30 секунд, чтобы позволить матригеле частично затвердеть в доле. Используйте стерильный аппликатор с полиэфирным наконечником для сбора любого клеточного раствора, протекающего в брюшную полость, чтобы предотвратить развитие неортотопических опухолей.

Точная инъекция в предстательную железу имеет решающее значение для развития ортотопической опухоли. Если вы будете особенно осторожны, чтобы избежать прокола семенного пузырька, медленно вводить суспензию раковых клеток и собирать любые утечки клеток, это увеличит успех этой процедуры.

Теперь аккуратно верните семенной пузырь и введенную долю в брюшную полость, не оказывая давления на мочку, и замените любые внешние ткани. Используя рассасывающиеся игольчатые швы обратного разрезания 5-0 викрила, закройте внутреннюю мускулатуру живота непрерывными швами, с последующим закрытием наружной кожи живота прерывистыми швами с использованием нейлоновых монофиламентных нерассасывающихся игольчатых швов обратной резки 4-0.

Затем проводят послеоперационное обезболивание и помещают мышь в клетку без подстилки наполовину на грелку с контролем до полного выздоровления.

• Prostate Cancer Model - A lab representation to study the progression & treatment of prostate cancer.
• Intraprostatic Injection - Technique of injecting medication or solution directly into the prostate.
• Matrigel - A gelatinous protein matrix used in tumor cell research.
• Orthotopic Tumor Model - Study model wherein tumor cells are implanted in their original organ.
• Seminal Vesicles - Male reproductive glands located near the prostate, integral to the injection procedure.

• Introduce Prostate Cancer Model – Biological method to examine prostate cancer (e.g., intraprostatic injection).
• Key Concepts – Involve steps like shaving, sterilizing, incising and suturing (e.g., prostate biopsy procedure video).
• Underlying Mechanisms – Seminal vesicles and anterior prostate lobes are involved (e.g., prostate cancer real images).
• Connect to Experiment – Demonstrate how injections ensure successful tumor implantation within prostate.

• What is intraprostatic injection used for in a prostate cancer model?
• How is the matrigel cancer cell solution involved in the procedure?
• Why is careful handling of seminal vesicles and prostate lobes crucial in this experiment?

• Practical Applications – Used in surgical training and cancer treatment research (e.g., prostate cancer injection).
• Industry Impact – Benefits medical industries, particularly oncology and urology (e.g., injection for prostate cancer).
• Societal Importance – Advancement in prostate cancer treatment techniques (e.g., injection prostate).
• Link to Scientific Advancements – Continuous improvement of prostate cancer models for research.