Индукция аутофагии на основе ADI в клетках рака предстательной железы: метод измерения аутофагического ответа в клетках на основе ферментов

Аутофагия — это внутриклеточный процесс, который способствует деградации нежелательных цитоплазматических компонентов и органелл в специализированных пищеварительных компартментах, называемых лизосомами. Чтобы оценить аутофагию, начните с адгезивной культуры клеток рака предстательной железы, экспрессирующих аутофагические маркерные белки, называемые LC3, связанные с зелеными флуоресцентными белками.

По своей природе в клетках рака предстательной железы отсутствует фермент аргининосукцинатсинтаза, необходимый для синтеза аминокислот аргинина. Таким образом, выживание и пролиферация этих клеток зависят от внешних добавок аргинина через среду.

Далее обработайте клетки аргининдеиминазой или ADI. ADI гидролизует свободный аргинин в среде, что приводит к истощению запасов аргинина. Как следствие, клетки подвергаются метаболическому стрессу, инициируя аутофагическую реакцию изнутри. Одновременно обрабатывайте клетки красным флуоресцентным красителем, который помечает лизосомы внутри клеток.

Во время аутофагии чашеобразные мембранные структуры, называемые фагофорами, собираются вокруг поврежденных цитоплазматических компонентов. В конце концов, они расширяются и запечатывают свой груз, ко