Экстракция белка и протеолиз: метод получения белков из образцов ткани опухоли предстательной железы и их ферментативного расщепления в пептиды

Начните с образца ткани опухоли предстательной железы. Повторно суспендируйте его в охлажденном буфере для лизиса, чтобы начать лизис клеток. Используйте гомогенизатор для дальнейшего разрушения тканевых структур и высвобождения их внутриклеточных компонентов. Произведите ультразвуковую обработку образца на льду, чтобы обеспечить полный лизис клеток, и срежьте ДНК, чтобы предотвратить интерференцию во время обработки пептидов. Нагрейте лизат, чтобы нарушить третичную структуру белков и развернуться.

Восстановители в буфере расщепляют дисульфидные связи между остатками цистеина. Впоследствии алкилирующие агенты в буфере алкилируют свободные тиоловые группы восстановленных цистеинов для предотвращения образования дисульфидных связей. Дополнительные денатурирующие агенты в буфере способствуют контролируемой денатурации и дальнейшему развертыванию белков.

Центрифуга для гранулирования остатков тканей и любых загрязнений. Соберите надосадочную жидкость, содержащую белковую смесь, в свежую пробирку. Добавьте фермент лизилэндопептидазу, чтобы расщепить пептидные связи в белках на С-конце остатков лизина, образуя крупные пептиды. Кроме того, обработайте ферментом трипсином, чтобы расщепить