Очистка пептидов: метод извлечения пептидов из переваренных белковых лизатов на основе RP-ВЭЖХ

Чтобы выделить и очистить пептиды, начинают с суспензии белкового лизата, содержащей смесь переваренных пептидов.

Обработайте смесь реагентом на основе трифторуксусной кислоты или ТФК. Этот анионный или отрицательно заряженный реагент образует на пептидах комплекс ионных пар с основными или положительно заряженными остатками, маскируя таким образом их заряд и улучшая гидрофобность пептидов.

Теперь соберите колонку высокоэффективной жидкостной хроматографии с обратной фазой, или RP-ВЭЖХ, содержащую неподвижную фазу на основе пористого диоксида кремния, иммобилизованную неполярными гидрофобными лигандами. Добавьте в колонку совместимый с пептидами уравновешивающий буфер для подготовки стационарной фазы перед применением образца.

Теперь загрузите подкисленный образец в колонку. Внутри колонки гидрофобные пептиды селективно адсорбируются к гидрофобным лигандам стационарной фазы. Пропустите промывочный буфер через колонку, чтобы удалить все несвязанные или нежелательные частицы.

Затем пропустите через колонку менее полярный органический буфер элюирования с высокой гидрофобностью. Благодаря своему селективному сродству к элюирующему буферу, связанные пептиды десорбируются из матрицы коло